特异性抗原致敏的dc细胞诱导cik及ctl细胞对肿瘤细胞抑瘤及凋亡作用的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文特异性抗原致敏的DC细胞诱导CIK及CTL细胞对肿瘤细胞抑瘤及凋亡作用的研究姓名：张苑申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王凤安201203中文摘要特异性抗原致敏的DC细胞诱导CIK及CTL细胞对肿瘤细胞抑瘤及凋亡作用的研究摘要目的：比较探讨特异性抗原致敏的树突状细胞(dentriticcellsDC)诱导的CIK(cytokineinducedkiller)细胞和(cytotoxiclymphocytes，CTL)对B16黑色素瘤的杀伤作用以及对肿瘤细胞凋亡作用的影响。树突状细胞(DC)是到目前为止发现的

2、功能最为强大的抗原递呈细胞，具有摄取、加工、递呈肿瘤相关抗原，并激活初始免疫功能的独特功能。细胞因子诱导的杀伤细胞CIK和细胞毒性T淋巴细胞CTL作为新型高效的免疫活性细胞，在肿瘤过继性细胞免疫治疗中得到了广泛的应用。本研究利用DC细胞与CIK细胞和CTL细胞共同培养，并且负载特异性抗原。期望可以获得数量更多、抗肿瘤活性更强、特异性更好的过继性免疫治疗效应细胞。方法：采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK和CTL细胞共同培养，分析其免疫表型，建立黑色素瘤动物模型，将其分为三组。第一组：DC．CIK效应细胞组；第二组：DC．CTL效应细胞

3、组；第三组：对照组。分别测量各组肿瘤的体积和重量。流式细胞(FCM)检测各组癌细胞增殖周期中Go／Gl期、S期、G2／M期各期细胞的比率和细胞凋亡指数(apoptosisIndexAI)、细胞增殖指数(proliferationIndexPI)的变化；透射电镜观察细胞凋亡超微结构的形态学变化；并用MTT法检测各组抗肿瘤免疫效应细胞对B16黑色素瘤肿瘤细胞的杀伤力。结果：DC．CIK和DC．CTL均可以影响到黑色素瘤肿瘤细胞周期，并且具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，但DC．CIK与DC．CTL之间未发现显著性差异，通过透射电镜观察可以发现两

4、实验组都能促进肿瘤细胞超微结构的凋亡改变，在应用流式细胞(FCM)检测技术对肿瘤细胞增殖周期中的变化进行检测中可以发现；实验组两组与对照组比较Go／GI期细胞比率、越显著升高，S期未发现明显变化，G2／M期细胞比率以及PI显著下降。DC—CTL细胞组杀伤活性较DC．CIK明显升高。且不同效靶比之间比较，随着效靶比的增高对肿瘤细胞的杀伤作用也越强。结论：特异性抗原负载的DC．CIK细胞与DC．CTL细胞对B16黑色中文摘要素瘤均有较强的杀伤作用。并且DC．CIK细胞和DC．CTL细胞都可以通过影响黑色素瘤细胞的细胞周期，诱导肿瘤细胞的凋

5、亡。关键词：树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；细胞毒性T淋巴细胞；黑色素瘤；免疫治疗：细胞凋亡英文摘要ContrastAmongInhibitionEffectAndApoptosisEffectofSpecificAntigen··sensitizedDC--CIKCellsandDC·-CTLCellsonTumotCellsABSTRACTObjective：ObjectivetOcontrasttheantitumoreffectandapoptosiseffectofspecificantigen-sensitizedDC

6、—·CIKcellsandDC··CTLcellsonTumorCells．Dendriticcells(Des)arethemostpotentantigenpresentingcells(APC)withtheabilitytoacquire，process，present，antigensandtheuniquecapabilityofinitatingprimaryimmuneresponsesagainsttumor-associatedantigens．Cytokineinducedkiller(CIK)cellsandc

7、ytotoxiclymphocytes．cells(CTL)havethenewtypeimmunocompetencecells．Cytokineinducedkillercellsandcytotoxiclymphocytescellshavewidespreadusinginadoptiveimmunetherapy．Dendriticcells(DCs)withcytokineinducedkiller(CIK)cellsandcytotoxiclymphocytescellswereseparatedandculturere

8、spectively,thendendriticceUs(DCs)wereloadedwithspecifictumorantigen．Byusingthismethods，wecanCO—culturetumorAnt