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《1基因的hep-2细胞瘤苗诱导cik细胞特异性抗肿瘤作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、1基因的Hep-2细胞瘤苗诱导CIK细胞特异性抗肿瘤作用<沈阳部队医药>2~PJ.1.9鬻74期)q携带B7—1基因的Hep一2细胞瘤苗诱导CIK细胞特异性抗肿瘤作用张晓晨吕昌龙曹建平姜志明蔺迪马东初摘要为探讨以转染137—1基因的喉癌细胞Hep一2瘤苗刺激CIK细胞能否激活其特异性抗肿瘤杀伤活性,将以携带137—1基因的重组腺病毒载体转染Hep一2细胞的瘤苗与CIK细胞共培养,检测CIK细胞的增殖率,表型改变,细胞毒活性.结果表明,经21天培养后,对照组和转染组增殖倍数分别约为2216倍和5246倍,差异有非常显着意义(P<0.01);未转染组约为2299倍与对照组相比差异
2、无显着意义(P>0.05).转染组CD3CD56细胞和CD3CD8细胞的百分含量明显高于对照组(P<0.01),而未转染组与对照组细胞表型改变无显着差异(P>0.05).细胞毒杀伤实验中,在效靶比为40:1条件下,以Hep一2细胞为靶细胞时,转染组杀伤活性明显高于对照组(P<0.01),未转染组与对照组无显着差异(P>0.05);以l(562细胞为靶细胞时,3组CIK细胞的毒性作用无明显差异(P>0.05).结论:转染137—1的Hep一2细胞瘤苗与CIK细胞共培养,可提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,可能是该瘤苗诱导了CIK细胞特异性抗肿瘤免疫应答的结果
3、,这为临床过继免疫治疗的应用提供了理论基础.关键词过继免疫CIK细胞免疫共刺激分子137—1体内回输免疫活性细胞的过继免疫疗法,是继手术,化,放疗后的第四大肿瘤治疗手段.细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是由多种细胞因子诱导的杀伤细胞,是一类能够高效非特异性地杀伤肿瘤细胞的免疫活性细胞,具有易于体外培养增殖,毒副作用小等优点,被认为具有良好的临床应用前景¨】.但是,目前临床研究使用的CIK细胞扩增数量不够稳定,且杀伤活性不够理想,因此,如何进一步提高CIK细胞的杀伤活性与效率,对于提高临床疗效具有重要意义.本研究旨在通过携带B7—1基因的重组腺病毒载体在体外修饰Hep一2细胞作为瘤苗诱导CIK细
4、胞的特异性免疫反应,以提高CIK细胞杀伤活性及其临床疗效,为肿瘤过继免疫治疗提供一种新型临床治疗方案.1材料和方法1.1试剂及仪器AdV—B7—1:由加拿大多伦多SunnybrookandWomensCollegeHealthScienceCentre的Dummer教授惠赠;Ad—GFP:由美国百特医疗用品公司提供;DMEM,AIM—V无血清培养基:购自美国Gibco公司;IL一1,IFN一:为美国Biological公司产品;抗CD3单抗(mAb):为古巴分子免疫学中心产品,购自北京瑞得合通药业有限公司;IL一2:购自北京瑞得合通药业有限公司;CytoTox96非放射性细胞毒试剂盒:为美国1
5、沈阳军区总医院医学实验科1100162中国医科大学基础免疫教研室Promega公司产品;抗CD3一FITC,抗CD8一PE,抗CD56一PE:购自美国BD公司;小牛血清:购自杭州四季青生物材料责任有限公司;淋巴细胞分离液:购自中国上海试剂二厂;MMC:KyowaHak—koKogyo公司产品.流式细胞仪:为美国BD公司产品;酶标分光光度计:为美国BioRad公司产品;---氧化碳孵箱:为德国HERA公司产品.1.2细胞白血病细胞62,喉癌细胞Hep一2(为HLA—A2阳性细胞株):由第四军医大学免疫教研室提供并由本室保存.1.3重组腺病毒介导B7—1基因在Hep一2细胞的表达1.3.1腺病毒载
6、体(AdV)对Hep一2细胞的转染率将Hep一2细胞以1x10接种于6孔板,12h后用Ad—GFP转染Hep一2细胞(稀释于0.5mlDMEM),转染强度(MOI)为50pfu/细胞,以DMEM为对照;2h后每孔加2ml培养液,至感染病毒48h后,在荧光显微镜下计数绿色荧光蛋白(GFP)表达阳性的细胞数,重复3次,计算转染率.1.3.2流式细胞仪检测腺病毒介导的B7—1基因的表达将Hep一2细胞以1x10接种于6孔板,12h后用AdV—B7—1基因转染Hep一2细胞(稀释于0.5mlDMEM),MOI为50pfu/细胞,以DMEM为对照;2h后每孔加2ml培养液,至感染病毒48hA,以0.25
7、%胰酶消化细胞,收集细胞.PBS液洗涤2遍,重悬于100PBS液中,加入1OFITC标记鼠抗人的B7—1单克隆抗体,37℃孵育1h,PBS液洗涤2遍,重悬于1mlPBS<沈阳部队嘲2009液中.流式细胞仪检测细胞表面的B7—1表达.1.4制备肿瘤疫苗分别在转染及未转染B7—1的Hep一2细胞中加入5Og/IIll的丝裂霉素c(MMC)作用30min.用PBS液洗涤3次,去除MMC,之后加入C
