靶向乳腺癌干细胞树突状细胞瘤苗抗肿瘤的分析

《靶向乳腺癌干细胞树突状细胞瘤苗抗肿瘤的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、靶向乳腺癌干细胞树突状细胞瘤苗抗肿瘤的研究中文摘要目的：通过无血清悬浮培养建立富集乳腺癌干细胞的方法并鉴定其生物学特性，探讨乳腺癌干细胞mRNA修饰后的人外周血树突细胞（dendriticcell，DC），在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法：通过贴壁和悬浮的方法培养乳腺癌MCF-7细胞并用流式细胞仪检测其干细胞表型CD44+/CD24-的表达，观察两群细胞的生长特点、软琼脂克隆形成能力、及其在NOD/SCID小鼠体内成瘤能力。采用体外扩增、转录的方法获得人乳腺癌细胞系MCF-7mRNA，并利用脂质体转染的方法将MCF-7mRNA导

2、入DC，流式鉴定转染后DC表面标记并与T淋巴细胞共孵育，通过体外MTT法检测其在体外对人乳腺癌细胞的特异性杀伤活性来探讨其体外诱导抗肿瘤免疫反应的能力。结果：无血清培养添加细胞因子的方法成功的培养出了富集干细胞表型为CD44+/CD24-的悬浮细胞球；用流式细胞仪对悬浮细胞和贴壁细胞进行干细胞表型鉴定，其干细胞表型表达高为90.16%，而普通贴壁细胞CD44+/CD24-的表型表达仅为10.19%；生长曲线显示悬浮细胞比贴壁细胞具有更强的增殖能力，软琼脂克隆形成试验显示悬浮细胞比贴壁细胞具有更强的克隆形成能力；NOD/SCID小鼠体内成瘤

3、试验显示贴壁细胞至少需106成瘤，而悬浮细胞则103则可成瘤；成功培养了树突状细胞和提取并体外扩增了乳腺癌干细胞MCF-7mRNA；经乳腺癌干细胞树突细胞诱导后的T淋巴细胞体外特异性杀伤活性与对照组相比显著增强（P<0.01）。结论：1.通过无血清培养的悬浮细胞富集的肿瘤干细胞具有自我更新分化能力，较强的增殖能力、软琼脂克隆形成及在NOD/SCID小鼠体内的致瘤能力；2．可以通过体外扩增的方法获得肿瘤干细胞抗原mRNA，既可以解决DC瘤苗抗原的来源问题又可以获得特异性的针对肿瘤干细胞的抗原，为最终根治肿瘤提供一种新的治疗策略。关键词：乳腺

4、癌肿瘤干细胞树突状细胞mRNA肿瘤免疫4Theanti-tumorstudyofdentriticcellsvaccinetargetingonbreastcancerstemcellsABSTRACTObjectives:Weestablishedamethodtoenrichthebreastcancerstemcellsviainserum-freemediumandidentifieditsbiologicalcharacteristics.Thenwestudiedthespecificimmunoresponseeffecto

5、fDCsinvitro，whichmodifiedbybreastcancerstemcellsmRNA.Methods:ThehumanbreastcancerMCF-7wereculturedinadherentandsuspensionculturemethods.TheexpressionofCD44+/CD24-wasmeasuredbyflowcytometry.WeobservedtheirgrowingcharacterinRPMI-1640medium,capabilityofcloneinsoftagarandthea

6、bilityoftumorigenisisoftwokindcellswhichwereinjectedintoNOD/SCIDmice.GettingmRNAfromhumanbreastcancercellsofMCF-7byamplificationandtranscriptioninvitro,andthentransfectingMCF-7mRNAintoDCsbylipofectamine.Co-culturingDCstestsurfacemarkersonDCsonflowcytometry.TheabilityofDCs

7、inducingtheanti-tumorimmunoresponsewasanalysisedbymeasuringtheexosomaticspecificcytolyticagainstMCF-7tumorcellsbyMTTinvitro.Results:WesuccessfullyculturedmammosphereswhichenrichedthestemcellphenotypeofCD44+/CD24_inserum-freemedium;theexpressionofCD44+/CD24_insuspensioncul

8、turewas90.16%,whileinadherentculturetheexpressionwasonly10.19%.Thegrowthcurvedisplayedthatsuspen