dccik细胞的生物学活性及抗淋巴瘤细胞的作用

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1、DCCIK细胞的生物学活性及抗淋巴瘤细胞的作用作者：魏绪仓，连小云，赵文理，杨娣娣，韩秀蕊，邢佩霓，李梅生【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DCCIK细胞的体外增殖能力、免疫表型变化、分泌细胞因子水平以及抗淋巴瘤细胞活性。方法正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞，将DC与CIK共培养，以CIK细胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数，MTT法测定杀伤活性，流式细胞术分析免疫表型，ELISA双抗体夹心法检测分泌干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素12(IL12)的水平。结果

2、DCCIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞(P<0.05)；DC、CIK细胞共培养后，CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞比率较同条件下CIK细胞组显著增多(P<0.05)；共培养3d，DCCIK细胞上清液中IL12、INFγ的分泌量均比CIK细胞单独培养的分泌量高(P<0.01，P<0.05)；在5∶1-40∶1的效靶比范围内，DCCIK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤率显著高于CIK细胞(P<0.05)，且杀伤率与效靶比呈正相关。结论DCCIK细胞的增殖能力、分泌细胞因子水平、抗淋巴瘤细胞活性均高

3、于CIK细胞，为DCCIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据。【关键词】CIK细胞；DCCIK细胞；生物学活性；抗淋巴瘤　　Thebiologicalactivityandantitumoreffectagainst　lymphomacellsinDCCIKcells　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheproliferationactivities,phenotypechanges,levelofsecretorycytokinesandantitumoractivityagainstlympho

4、macellsofDCCIKcellsincocultureofcytokineinducedkiller(CIK)cellshealthyhumanperipheralbloodmononuclearcells.Theyberofcellsetry,secretionsofINFγandIL12inedbyELISA.ResultsTheproliferationactivityofDCCIKcellsecondition,theratioofCD3+CD56+andCD3+CD8+doublepositivecellsinC

5、IKcells5∶1to40∶1,theantitumoreffectofDCCIKcellsuchhigherthanthatofCIKcells(P<0.05),andthiseffectoreffectagainstlymphomacellsofDCCIKcellsentalbasisfortheimmunotherapyofDCCIKcells.　　KEYI1640培养基及四甲偶氮唑盐(MTT)均为Sigma公司产品，培养用CD3McAb由Neomarkers公司提供，rhIL1、rhIFNγ、rhTNFα为上海

6、生物制品研究所产品，rhGMCSF为先灵葆雅公司惠赠，rhIL4购自GibcoBRL公司，流式细胞仪标记抗体CD3、CD3CD4、CD3CD8、CD3CD56及检测细胞因子(IL12、IFNγ)的ELISA试剂盒均购自晶美生物工程有限公司，鼠抗人CD1a、CD14、HLADR和FITC兔抗鼠荧光二抗购自中国医学科学院天津血液学研究所。　　1.2靶细胞来源Raji为人组织淋巴瘤细胞株，引自上海第二医科大学瑞金医院血液学研究所；新鲜淋巴瘤细胞取自外科手术切除的淋巴瘤标本(淋巴结或脾脏)，去除结缔组织和坏死组织，剪成1mm3的组织块，2

7、.5g/L的胰酶消化后过100钢目，经淋巴细胞分离液分离，获得恶性淋巴瘤细胞(malignantlymphomacells,MLC)，存于液氮中待用。要求靶细胞比例>95%，活体细胞>90%。　　1.3CIK细胞的培养扩增采集健康人外周血，肝素抗凝，以FicollHypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)，RPMI1640洗3次，调细胞密度为4×106/mL；贴壁培养1-2h，收集悬浮细胞用含10%(体积分数)小牛血清(FSC)的RPMI1640液调细胞密度为1×106/mL，第0天加入rhIFNγ1000u/

8、mL，放置37℃，5%(体积分数)CO2孵育箱中培养24h后加入rhIL2300u/mL、rhIL1100u/mL、CD3McAb50μg/L，继续培养，以后每3d更换新鲜培