dccik细胞的生物学活性及抗淋巴瘤细胞的作用论文

《dccik细胞的生物学活性及抗淋巴瘤细胞的作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、DCCIK细胞的生物学活性及抗淋巴瘤细胞的作用论文魏绪仓，连小云，赵文理，杨娣娣，韩秀蕊，邢佩霓，李梅生【摘要】目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DCCIK细胞的体外增殖能力、免疫表型变化、分泌细胞因子水平以及抗淋巴瘤细胞活性。方法正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞，将DC与CIK共培养.freeloreffectagainstlymphomacellsinDCCIKcellsABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheprolifer

2、ationactivities,phenotypechanges,levelofsecretorycytokinesandantitumoractivityagainstlymphomacellsofDCCIKcellsincocultureofcytokineinducedkiller(CIK)cellshealthyhumanperipheralbloodmononuclearcells.Theyberofcellsetry,secretionsofINFγandIL12inedbyELIS

3、A.ResultsTheproliferationactivityofDCCIKcellsecondition,theratioofCD3+CD56+andCD3+CD8+doublepositivecellsinCIKcells5∶1to40∶1,theantitumoreffectofDCCIKcellsuchhigherthanthatofCIKcells(P0.05),andthiseffectoreffectagainstlymphomacellsofDCCIKcellsentalbasi

4、sfortheimmunotherapyofDCCIKcells.KEYcAb由Neomarkers公司提供，rhIL1、rhIFNγ、rhTNFα为上海生物制品研究所产品，rhGMCSF为先灵葆雅公司惠赠，rhIL4购自GibcoBRL公司，流式细胞仪标记抗体CD3、CD3CD4、CD3CD8、CD3CD56及检测细胞因子(IL12、IFNγ)的ELISA试剂盒均购自晶美生物工程有限公司，鼠抗人CD1a、CD14、HLADR和FITC兔抗鼠荧光二抗购自中国医学科学院天津血液学研究所。1.

5、2靶细胞来源Raji为人组织淋巴瘤细胞株，引自上海第二医科大学瑞金医院血液学研究所；新鲜淋巴瘤细胞取自外科手术切除的淋巴瘤标本(淋巴结或脾脏)，去除结缔组织和坏死组织，剪成1mm3的组织块，2.5g/L的胰酶消化后过100钢目，经淋巴细胞分离液分离，获得恶性淋巴瘤细胞(malignantlymphomacells,MLC)，存于液氮中待用。要求靶细胞比例95%，活体细胞90%。1.3CIK细胞的培养扩增采集健康人外周血，肝素抗凝，以FicollHypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)，RP

6、MI1640洗3次，调细胞密度为4×106/mL；贴壁培养1-2h，收集悬浮细胞用含10%(体积分数)小牛血清(FSC)的RPMI1640液调细胞密度为1×106/mL，第0天加入rhIFNγ1000u/mL，放置37℃，5%(体积分数)CO2孵育箱中培养24h后加入rhIL2300u/mL、rhIL1100u/mL、CD3McAb50μg/L，继续培养，以后每3d更换新鲜培养液，补加rhIL2。1.4DC的体外培养参照文献方法3。获得健康人外周血MNC中的贴壁细胞，用含10%(体积分数)FSC的R

7、PMI1640培养基培养，其中包含rhGMCSF550u/mL，rhIL4500u/mL。隔日半量换液，补加细胞因子，收获前72h再加入rhTNFα50u/mL，诱导DC成熟。1.5DCCIK细胞的培养收获培养第9天的DC细胞及CIK细胞经活细胞计数后按1∶5混合培养，第3天和第6天，收集细胞做生物学活性测定。1.6细胞毒活性的测定以不同效靶比(5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、40∶1)，把效应细胞和靶细胞放入96孔板，另设单独靶细胞及效应细胞孔，每孔设3个复孔，置37℃，5%(体积分数)CO

8、2孵育箱中培养48h，按本室建立的MTT法4测杀伤活性。杀伤活性(%)=1-(实验组A-效应组A)/靶细胞A×100%。1.7细胞免疫表型的分析用流式细胞仪检测CIK及DCCIK细胞的免疫表型；间接免疫荧光法测定DC免疫表型。1.8细胞因子的检测收集培养细胞上清液进行IL12、IFNγ水平测定。采用ELISA双抗夹心法，操作按试剂盒说明。1.9统计学处理数据以±s表示，组间比较采用t检验，以P0.05为差异