cik细胞不同培养时间的生物学活性

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1、CIK细胞不同培养时间的生物学活性［摘要］目的探讨CIK细胞培养时间与细胞毒活性的关系。方法抽取恶性肿瘤患者的外周血分离单个核细胞(PBMC),用细胞因子诱导培养CIK细胞，于培养第0、7、14、21、28、35、42天分别收取培养的CIK细胞。用流式细胞仪分析检测CIK细胞中CD3+、CD56+双阳性细胞的百分率及增值率，用KTT法测定其对肺癌细胞株A549杀伤活性。结果培养第21天细胞扩增倍数为(372±1.87)倍，培养第28天细胞扩增倍数为(410±6.52)倍，两者比较差异有统计学意义(PCI

2、K细胞的表型变化2.2用流式细胞仪分析不同培养时间结果培养第0天⑶3+、CD56+双阳性细胞仅占(6.20±1.12)%，第14天达(18.60±4.50)%，第28天为(35.60±2.30)%，迗最高峰，其后逐渐降低。见表1。2.3MTT法检验培养第0、7、14、21、28、35、42天的CIK细胞对肺癌细胞系A549效靶比10:1时杀瘤率分别是14%、51%、86%、95%、68%、50%、27%效靶比20:1时杀瘤率为15%、88%、98%、100%、81%、67%、53%；效靶比40:1时杀瘤

3、率为17%、98%、100%、100%、95%、75%、70%o见图1。结果显示，当效靶比为10:1时，培养21d的CIK细胞杀瘤率是95%，迗最高峰；当效靶比为20:1时，培养21d的CIK细胞杀瘤率已迗100%;当效靶比为40:1时，培养14d的CIK细胞杀瘤率即可达到100%。3讨论CIK细胞是在体外条件下通过加入不同的细胞因子（IFN-y、IL-1、IL-2、CD3McAb）刺激外周血单个核细胞培养诱导而成，同时表达CD3、CD56两种膜蛋白分子。与既往临床使用的过继免疫疗法相比，CIK细胞具有

4、增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感、对正常骨髓造血前体细胞细胞毒性小等特点［4］，是目前发现的杀伤肿瘤细胞活性强，适合临床应用的一种理想的效应细胞［5］，其主要效应细胞为CD3+、CD56+T淋巴细胞，且细胞毒作用几乎唯一存在于CD3+、CD56+表型中。CD3+、CD56+细胞可释放大量的具有细胞毒性的胞浆颗粒而对靶细胞发挥溶细胞作用［6］。这种效应细胞在正常外周血中极其少见，仅为1%〜5%。已经证实培养过程中CIK细胞毒作用的增加源于单个细胞基础上的细胞毒作用的提高和非活性

5、细胞被激活，成为有细胞毒作用的细胞，即共表迗CD56+和CD3+的细胞数量的显著增加［7］。由此可见，就免疫治疗来说，足够数量的、高免疫毒性的免疫效应细胞是保证治疗效果的必备条件。李文等［8］报道，CIK细胞总数应＞5X109才具有治疗作用。李香丹等［9-11］根据实验研究，认为每杀伤1个肿瘤细胞需要40个淋巴细胞，所以在肿瘤生物治疗中，输注细胞数量与疗效呈正相关，应重点研究如何培养出高数量、高杀瘤活性的CIK细胞。从实验结果可以看出，培养时间可能是影响CIK细胞总数、CIK细胞中CD3+、CD56+双

6、阳性细胞的百分率和CIK细胞杀伤活性的重要因素。因此笔者对不同培养时间的CIK进行了分析，期望寻找CIK细胞最佳培养时间区间。结果显示：培养第21天细胞扩增倍数为(372.00±1.87)倍，培养第28天细胞扩增倍数为(410.00±6.52)倍，两者比较差异有统计学意义(P