肿瘤新生血管特异靶分子的研究

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1、分类号------------------------密级------------------UDC---------------------------编号-------------------中国科学院硕士学位研究生学位论文肿瘤新生血管特异靶分子的研究朱晓东指导教师阎锡蕴研究员中国科学院微生物所北京市中关村北一条11号申请学位级别------硕士-----学科名称专业-----微生物学-----论文提交日期---二零零零年六月----论文答辩日期--二零零零年七月论文授予单位名称--------中国科学院微生物所-答辩委员会主席------------评阅人-----

2、---------二零零零年七月朱晓东硕士学位论文目录中文摘要……………………………………………………1英文摘要……………………………………………………3缩写表……………………………………………………5文献综述……………………………………………………7肿瘤新生血管相关内皮细胞受体研究的进展…………………7参考文献…………………………………………………18实验研究工作…………………………………………………281引言……………………………………………………282实验材料与主要仪器……………………………………293实验方法………………………………………………304结果与讨论……

3、………………………………………364.1AA98抗原的性质鉴定………………………………364.2AA98抗原的组织分布………………………………374.3AA98抗原在细胞上的分布………………………404.4AA98抗原可能是一个肿瘤血管生成特异表达的新分子415参考文献………………………………………………43附图…………………………………………………………45致谢…………………………………………………………561朱晓东硕士学位论文中文摘要肿瘤的生长与转移依赖于血管生成。血管生成是指从已存的血管通过出芽或分裂形成新生毛细血管。新生毛细血管不同于正常组织血管，其更新周期为几天

4、，而正常组织血管则通常是几百天。新生血管内皮细胞上表达了一些处于静止期血管内皮上所没有或低表达的分子，这些分子可以作为抗肿瘤血管治疗的靶位点。封闭其功能，可抑制血管内皮细胞的生长、迁移或侵润，从而高效地破坏新生血管的形成。我们筛选获得了一株针对肿瘤新生血管特异的鼠单克隆抗体（MAb），命名为AA98。体外、体内实验均表现良好的抗血管生成和抗肿瘤的活性。本研究分析了AA98抗体所对应的抗原靶分子的组织分布、细胞定位及理化性质鉴定。我们的实验结果表明AA98靶分子不同于国内外已报道的肿瘤新生血管内皮细胞标志物，很可能是一种新型的肿瘤新生血管标志物。本实验主要包括：1．AA98

5、抗原的性质鉴定将培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）制备蛋白粗提液，采用Westernblot的方法鉴定了靶分子的分子量，约97KD。并用生物素标记了HUVEC表面的膜蛋白及免疫沉淀的方法，获得靶分子。认为鉴定的AA98抗原可能是一个由一条多肽链组成的单体蛋白。蛋白内部存在的二硫键，对抗原的免疫结合活性十分重要。同时也说明AA98抗原是一个膜蛋白。用糖Kit分析，说明靶分子是一个糖蛋白。非还原等电聚焦板状电泳测定其等电点为5.0左右。另外，通过石蜡切片的免疫组化，提示靶分子可能是一个热敏感蛋白。2．AA98抗原的组织分布采用免疫组化的方法，检测了人多种肿瘤组织和正常组织的

6、靶抗原表达。发现肿瘤的新生血管内皮有很强、很特异的信号。而绝大多数正常组织及其毛细血管均没有检测到靶分子的存在。AA98抗原在胎儿、新生儿脐1朱晓东硕士学位论文静脉内皮表面、胎盘微血管及胎盘组织中有表达，特别是内皮细胞强表达。AA98抗原可能是伴随着新生血管（病理状况如肿瘤的发生和生理状况下）产生的特异分子。3．AA98抗原在细胞上的分布使用酶联免疫吸附、Westernblot等方法鉴定AA98抗原在体外培养的几种细胞系上的分布，说明AA98抗原在HUVEC细胞系中表达，而在其它几种肿瘤细胞系上低表达或很难检测到表达。4.AA98抗原可能是一个肿瘤血管生成特异表达的新分子

7、通过对靶分子理化性质分析以及与已知报道的肿瘤血管生成标记物的比较。说明其的特异性和新颖性。AA98抗原可能是一个伴随着肿瘤新生血管高表达的分子。2朱晓东硕士学位论文3AbstractTumorgrowthandmetastasisareangiogenesisdependent.Angiogenesisreferstotheformationofnewcapillariesbyendothoelialcellsproutingorsplittingfrompre-existingvessels.Thenewcapillarie