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1、(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:优点:在电泳过程中可监控蛋白质分离状态;可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点:染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力.购买信息:中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD）中范围蛋白质分子量标准(24-97KD)MTB087-120次国产80元分子量大小:（24、3
2、6、53、66、97KD）低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD）M3913-120次Sigma280元低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD）M3913-15×20次Sigma1198元分子量大小:（6.5、20、24、29、36、45、66KD）高范围蛋白质分子量标准（36-205KD)M3788-120次Sigma280元高范围蛋白质分子量标准（36-205KD)M3788-15×20次Sigma1198元 分子量大小:（36、45、55、66、84、97、116、205KD）宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD)
3、M4038-120次Sigma280元宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD)M4038-15×20次Sigma1266元分子量大小:（6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD）预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD) 20次自产320元预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD) 50次自产680元分子量大小:80,60,39,23,18kDa预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) 20次自产320元预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) 50次自产680元分子量大小:210,140,106
4、/102,80,52,20kDa预染的中高范围蛋白质分子量标准(18.3-210KD)2668148次Pierce1214元(二)蛋白质转印a)膜的选择:主要采用NC膜和PVDF膜,其比较如下: NC膜PVDF膜物理强度差好蛋白质结合能力80-100ug/cm2100-200ug/cm2溶剂耐受力无有考马斯亮兰染色否可以ECL检测稍差可以快速免疫检测否可以SDS存在下蛋白质结合差好质谱分析否可以(尼龙膜和NC膜的特点相似,主要用于核酸杂交)b)膜的大小:请根据胶的面积来确定.c)膜的孔径:0.45μm适用一般蛋白质.0.2μm适用小分子蛋白质.购买信
5、息:66485硝酸纤维素膜,0.45um,30cmX3m/卷美国Gelman1395元/卷 硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm美国Gelman80元/张 硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm国产30元/张60207尼龙膜,0.45um,30cmX3m/卷美国Gelman2310元/卷 尼龙膜,0.45um,20cmX15cm美国Gelman90元/张 尼龙膜,0.45um,直径100mm,50张/盒国产260元/盒66543PVDF膜,0.45um,30cmX3m/卷美国Gelman1690元/卷 PVDF膜,0.45um,直径
6、100mm,50张/盒国产260元/盒(三)蛋白质的显示(大部分实验不需要进行此步操作)蛋白质染色的染料有很多种,各种的特点均不一样. 蛋白质灵敏度影响免疫检测Ponceau-SRed丽春红5ug无快绿Fc5ug无SyproRose1-2ng无氨基黑10B1ug有考马斯亮兰R-250500ng有印度墨100ng有胶体金4ng有购买信息:Ponceau-SRed丽春红Sigma原装10g182元快绿FcAmresco分装25g258元氨基黑10BSigma分装10g168元考马斯亮兰R-250Amresco分装10g168元蛋白银染试剂盒自产MTB08
7、3-110次188元SDS-PAGE蛋白快速染色试剂自产25次100元WesternBlot膜可逆染色剂自产100ml100元(四)免疫检测有各种不同的免疫检测方法.请注意选择.方法不同,则所需的试剂也不同.如需方便,可选择完整的试剂盒.A.封闭膜:这一步会影响结果的成败和背景的强度.常用封闭剂为BSA和Tween20.脱脂干奶粉不适合用于糖蛋白和生物素标记抗体.购买信息:牛血清白蛋白组份五BSAAmresco分装25g280元Tween20Amresco分装500ml150元WesternBlot膜封闭剂自产100ml100元B.一抗:根据目的蛋白
8、质选择.单抗或多抗均可.注意已变性蛋白质无法检测,必须采用非变性胶电泳.我司有R&D,Genex,Santa
