SYBR Green I

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1、SYBRGreenI概念SYBRGreenI是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBRGreenI发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBRGSYBRGreenIreenI的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBRGreenI的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。SYBRGreenI核酸染料(电泳用)SYBRGreenI是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种

2、电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。SYBRGreenI与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBRGreenI染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。SYBRGreenI适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。SYBRGreenI与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。

3、另外，SYBRGreenI与EB相比，诱变能力大大降低。SYBRGreenI核酸凝胶染液(SYBRGreenNdcleicAcidGelStains)是一种高敏感性的荧光染液，用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。当染液与核酸结合后，SYBRGreenI核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强，因此经SYBRGreenI核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比，没有背景荧光。为获得最佳的结果，凝胶最好在跑胶后再进行染色。SYBRGreenI核酸凝胶染液用于低含量的PCR产物，凋亡研究及异源

4、双链分析中少量DNA的检测较为理想。可应用于：DNA和RNA的检测；SSCP及异源双链分析。SYBRGreenI核酸染料特点高灵敏：至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。操作简单：无须脱色或冲洗。适用范围广：可适用于多种电泳分析。使用方便：不影响其它修饰酶作用。经济：价格比银染便宜。电泳用SYBRGreenI使用方法SYBRGreenI预染方法1.该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳2.工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBRGre

5、enⅠ稀释100倍，即为SYBRGreenⅠ工作液。SYBRGreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。3.制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。4.样品染色：向分析样品中加入SYBRGreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBRGreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBRGreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。5.DNAMarker染色：将5μLDNAMarker和1μLSYBRGreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBRGreenⅠ与DNA充分结合。6.上样、电泳：按常规操

6、作。SYBRGreenI后染方法1.按照常规方法进行电泳。2.用PH7.0-8.5的缓冲液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀释SYBRGreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。3.将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。4

7、.用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。SYBRGreenI使用注意事项1.在"SYBRGreenⅠ预染色方法"中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBRGreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。2.在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBRGreenI可以全部从双链核酸上去掉。3.如果想对用SYBRGreenI染过的胶进行Southernblots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。4.在紫外照射透视下，与双链DNA

8、接合的SYBRGreenI呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。5.SYBRGreen对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。SybrGreenI染料法操作过程1实验方法囊腔组织经液氮速冻后，放入-70℃冰箱保存备用。Real-timePCR法检测EMMPRIN的mRNA含量。1.1组织总RNA提取：（1）从液氮中取出组织，用已处理过的剪刀剪取约100mg组织