猪嗜血支原体sybr green qpcr检测方法的建立及应用

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1、＇分类号Ｓ８５８．２８学号Ｚ２０１１４１Ｈ＇ｕ＇Ａ＇？－ｎ巧袭老大聲非全日制硕上专业学位论文猪嗜血支原体ＳＹＢ民ＧｒｅｅｎｑＰＣ艮检测方法的建立及应用姓名：王永威指导教师：姜俊兵教授学位类别：兽医硕±培养单位：动物科技学院中国？山西？太谷二〇—五年十二月学位论文原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文，是在导师指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对

2、本文研究做出过重要贡献的个人和集体，均已在文中从明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。＇主作者签違（亲笔）：年月日学位论文版枚使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定。即学位论文的知识产权属山西农业大学；同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的原件、复印件和电子版；允许论文被查巧和借阅；本人授权山西农业大学可从将学位论文的全部或部分内容编入有＇关数据库进行检索、；〔，可＂采用影印、缩印或柱描等复制手段保存编学位论文。占＇作者签

3、違１！年月曰（亲笔）：户、若月导师签名（亲笔／巧＾日目录ｍ＾１２前胃１病原学特性２１．１分类及命名２１．２形态、染色、繁殖及培养特征３１．３理化特性４２猪嗜血支原体的检测方法５２．１形态学检测５２丄１压片镜检５２丄２染色镜检５２丄３电镜检测５２．２免疫学检测６，，２．２．１补体结合试验６６２．２．２间接血凝抑制试验２．２．３酶联免疫吸附试验６２．３分子生物学检测６２．３．１ＤＮＡ杂交试验６２．３

4、．２ＰＣＲ额！１７检３流行病学７４发病机ａ８４．１致红细胞病变８４．２冷凝集素的作用８４．３对血管和血液理化性质的影响８４．４免疫抑制９５临床症状及病理变化１０５．１临床症状１０５．２病理变化１０６研究目的和意义１１刪与方法１２１１２材料１．１猪只及病原体１２１．２主要仪器１２１．３试剂与耗材１３１．４主要试剂的配制１３１５ＰＣＲ扩增引１４．Ｑ物的设计及合成２货皮１４２．１血液基因組ＤＮＡ的提取

5、１４２．２目的基因的扩増１５２．３目的基因的回收１５２．４目的基因的克隆１５２．５重组质粒的提取１６２．６重组质粒的鉴定及浓度测定１６２．７ＱＰＣＲ方法的建立１６２．８ＰＣＲ标准曲线的建立１７ｑ２．９敏感性试验１７２７．１０特异性试验１２．１１重复性试验１７２．口ＱＰＣＲ与常规ＰＣＲ的比较１７结Ｓ１８１常规ＰＣＲ扩増及特异性试验结果１８２目的片段测序结果１８３重组质粒的构建１９４ＰＣＲ扩增动力学曲线、标准曲线及溶解曲

6、线１９Ｑ５ＰＣＲ敏感性试验２１Ｑ６ＰＣＲ特异性试验２２Ｑ７ＱＰＣＲ重复性试验２３８ＰＣＲ与常规ＰＣＲ的比较２３Ｑ讨论２４１Ｍ．ＳＵ投检测方法的比较２４２ＳＹＢＲＧＲＥＥＮＰＣＲ２６Ｑ检测Ｓ论２７参考文献２９Ａｂｓｔｒａｃｔ３３致谢３５猪嗜Ｊｉｌｌ支原体ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｑＰＣＲ检测方法的建立及应用摘要目的：建立检测ＭｓＭｉｓ的ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｑＰＣＲ方法。方法：通过克隆ｑＰＣＲ扩增片段建立质

7、粒标准品，进行巧ＣＲ护增获得标准曲线；通过敏感性试验，特异性试验和重复性试验评估ｑＰＣＲ方法。结果：（ｉＰＣＲ可＂特异性扩增到Ｍｓｗｂ化ＳｒＲＮＡ基因中大小为１５７ｂｐ的片段，而对＾＝ＰＲＲＳＶ、ＰＣＶ２、ＰＰＶ、ＰＲＶ、￡．ＣＯ＆和＆ａｗｅｗ等病原体没有扩增；标准曲线的１０．９９６，＝Ｅ９８．４％ＰＣＲ的灵敏度是民的ｃＰＣＲ与ＰＣＲ对品检测无显；ｃ常规ＰＣ１００倍［；ｊ常规样著差异（；）＞０．０５）。结论：成功建立了检测Ｍｓｗｂ感染的ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｃｉＰＣＲ方法，其灵敏性高，特

8、异性和重复性良好ｊｕｂ进行定量检测。，适用于临床上和实验室中对Ｍ关键词：猪嗜血支原体；ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｑＰＣＲ；检测方法－－１—＿Ｘ＾＿Ｋ刖頁＇＇’猪嗜血支原体所ａｓｗｓＭｓｗｓ）即猪附红细胞体（砂ｓｗｓ，，１２一ＥｊＭｂ［’１）、血。，是寄生于猪红细胞浆及骨髓内的类病原微生物该病原所引起的疾病称为猪附红细胞体病