Triton损伤成年大鼠嗅上皮对嗅球钙结合蛋白-D和小白蛋白表达影响

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1、中国药理学与毒理学杂志２００５年１０月；１９（５）：３３３－３３７ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００５Ｏｃｔ；１９（５）：３３３－３３７·３３３·淫羊藿苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用李梨１，２，吴芹２，周岐新１，石京山２（１．重庆医科大学生化与分子药理学重点实验室，重庆４０００１６；２．遵义医学院药理学教研室，贵州遵义５６３００３）摘要：目的设想神经元缺氧损伤与自由基损伤线脉循环、增加脑血流量等作用［１，２］。作者以前的实粒体有关，由此探讨淫羊藿苷的保护作用机制。方验证明淫羊藿苷对原代培养皮质神经元缺氧缺糖损法采用Ｆｅ２＋／维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）为氧自由基生

2、成系伤具有保护作用［１］，但对其细胞保护作用的确切机统建立氧自由基损伤线粒体的体外模型。观察淫羊制还不完全清楚。本研究在此基础上以Ｆｅ２＋／维生藿苷对线粒体肿胀度、呼吸链复合体酶Ⅰ～Ⅳ活性、素Ｃ（ｖｉｔａｍｉｎＣ，ＶｉｔＣ）为氧自由基生成系统建立体丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。结果Ｆｅ２＋／ＶｉｔＣ（１外模拟氧自由基损伤的线粒体模型，观察了淫羊藿ｍｍｏｌ·Ｌ－１／１ｍｍｏｌ·Ｌ－１，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１／１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）苷是否对Ｆｅ２＋／ＶｉｔＣ引起的脑线粒体损伤具有保护可使线粒体的肿胀度和ＭＤＡ含量显著增加，呼吸链作用，以期为其用于延缓衰老和防治某些神经系统复合体酶Ⅱ～Ⅳ活性不

3、同程度下降。预先加入淫羊疾病的可能性提供实验资料。藿苷（０．０３和０．１ｍｇ·Ｌ－１）能显著抑制线粒体肿胀，减少ＭＤＡ含量，提高呼吸链复合体酶Ⅱ～Ⅳ的活１材料和方法性。结论淫羊藿苷对氧自由基损伤的大鼠脑线粒体呼吸链具有保护作用。１．１实验动物、试剂和仪器关键词：淫羊藿苷；活性氧；线粒体Ｗｉｓｔａｒ大鼠，雄性，体重２５０～２８０ｇ，２～３月龄，由重庆医科大学实验动物中心提供。中图分类号：Ｒ９６３淫羊藿苷单体，高效液相色谱检测纯度大于文献标识码：Ａ９８％，由贵州省中国科学院天然产物化学重点实验文章编号：１０００３００２（２００５）０５０３３３０５室杨小生研究员提供。鱼藤酮（ｒｏｔｅ

4、ｎｏｎｅ）、叠氮钠（ｓｏｄｉｕｍａｚｉｄｅ）、抗霉素Ａ（ａｎｔｉｍｙｃｉｎＡ）、辅酶Ｑ１０线粒体是重要的细胞器，不仅参与细胞的能量（ＣｏＱ１０）、还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）、Ｆｉｃｏｌｌ４００、Ｔｒｉｓ碱、代谢，也是自由基产生的主要场所。近年来对线粒细胞色素Ｃ、２，６二氯酚啶酚（２，６ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏ体的研究日益受到重视。越来越多的证据表明，许ｌｉｎｄｏｐｈｅｎｏｌ，ＤＣＰＩＰ）均购自Ｓｉｇｍａ。蛋白含量和丙二多疾病如缺血缺氧损伤、老年性痴呆、衰老、帕金森醛（ＭＤＡ）含量测试盒购自南京建成生物工程公司。病等发生、发展均与线粒体损伤密切相关。寻找有主要仪器有ＵＶ２６５可

5、见紫外分光光度计（日效的抗氧化损伤的线粒体保护剂对于防治这些疾病本岛津公司）；３ｋ３０低温高速离心机（Ｓｉｇｍａ）；ＫＲ具有重要意义。淫羊藿苷（ｉｃａｒｉｉｎ）是从小檗科淫羊２００００Ｔ型低温超速离心机（美国Ｋｕｂｏｔａ）；ＸＷ８０Ａ藿属植物中提取的黄酮醇苷类化合物，文献报道淫型旋涡混合器（江苏海门麒麟医用仪器厂）。羊藿苷具有免疫调节、影响内分泌、抗氧化、改善冠［３，４］１．２大鼠脑线粒体的提取大鼠断头迅速取全脑，去小脑，称重后按１∶９收稿日期：２００５０１１０接受日期：２００５０４１１（Ｗ／Ｖ）比例加入预冷的匀浆液（ｍｍｏｌ·Ｌ－１：蔗糖基金项目：贵州省高校发展专项基

6、金项目（黔科教２５０，ＥＤＴＡ０．５，ＴｒｉｓＨＣｌ１０，ｐＨ７．４０）置于玻璃匀浆２００３１１２）器中冰浴手动匀浆。２０００×ｇ离心３ｍｉｎ。取上清作者简介：李梨（１９７５－），女，河南省开封人，药理学博士生，讲师，主要从事神经药理与生化药理研究。液，１２０００×ｇ离心８ｍｉｎ。将沉淀仔细悬于Ｆｉｃｏｌｌ梯联系作者Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｊｓ＠ｚｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎＴｅｌ：（０８５２）度中，１１５００×ｇ离心３０ｍｉｎ。弃上清液，沉淀用匀８２０５４１６Ｆａｘ：（０８５２）８２０４７２９浆液洗１次，１２０００×ｇ离心８ｍｉｎ，所得沉淀即为线·３３４·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉ

7、ｃｏｌ２００５Ｏｃｔ；１９（５）粒体。以上所有操作均在４℃进行。Ｆｏｌｌｉｎ酚法测ｍｇ·Ｌ－１）、ＣｏＱ（６５·Ｌ－１）、鱼藤酮（２ｍｇ·Ｌ－１）、１０μｍｏｌ定线粒体悬液的蛋白含量，调整浓度为线粒体蛋白ＤＣＰＩＰ（８８ｍｍｏｌ·Ｌ－１）混匀后，３０℃温孵５ｍｉｎ。加入新２ｇ·Ｌ－１。用于测定呼吸链复合体酶的线粒体蛋白配的琥珀酸钠（２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）启动反应，１ｍｉｎ内连续悬液分装后－７０℃保存，保存时间不超过２周。测测定Ａ６００ｎｍ值的变化。以１ｍｉ