环孢素a滴眼液对损伤角膜上皮水通道蛋白3表达的影响

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1、环孢素A滴眼液对损伤角膜上皮水通道蛋白3表达的影响【关键词】环孢素A;角膜上皮;创伤修复;AQP3　　AbstractAIM:Tolearntheupregulationofaquaporinprotein3(AQP3)expressioninthecornealepithelialhealingprocessofmicebycyclosporinA(CsA)eyedrops.METHODS:Modelsechanicalcurettagemethodofcornealepitheliuminmicetoobservet

2、herepairofcornealepithelium.CorneasmunohistochemicalstainingtoobservetheexpressionofAQP3.RESULTS:AQP3expressioncouldbeseeninthebasalcelllayerofthecornea.Afterapplicationsof125,250,500,1000mg/LCsAeyedrops,theAQP3expressioninjuryg/LCsAeyedrops,thereentalgroupandcont

3、rolgroup6hoursafterinjury,g/LCsAeyedropscanacceleratemicecornealepithelialdamagerepairbyincreasingtheexpressionofAQP3.　　KEYm直径的环钻在角膜中央标记创伤区，机械法刮除标记区内的角膜上皮。　　1.2　方法　　将35只小鼠随机分为7组，分别于角膜上皮损伤后接受PBS及125，250，500，1000，2000，4000mg/LCsA滴眼液点眼，1滴/次，每3h1次，共12h。60只小鼠随机分为两组，去角膜

4、上皮后，20g/L荧光素钠染色，即刻照相1次。对照组滴PBS，实验组滴500mg/LCsA后分别于6，12，18，24，30h，20g/L荧光素钠染色后照相，观察角膜上皮修复情况，脱颈椎处死，取角膜，进行AQP3免疫组化染色，光镜下观察AQP3表达情况，并应用图像分析软件进行量化。用不规则面积软件分析，测得修复速率。以0h创伤面积为100％，后续各时间点以其未修复区面积与0h创伤面积相比所得百分数来衡量其修复情况。　　统计学分析：采用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析，实验数据以±s表示，采用两样本t检验，P＜0.05

5、为差异有显著意义。　　2　结果　　角膜上皮基底细胞层可见AQP3的表达，呈棕黄色颗粒状，上皮表层及基质无表达。小鼠角膜上皮损伤12h后，应用125，250，500，1000mg/LCsA滴眼液点眼，角膜上皮免疫组化AQP3的表达单位面积IOD值分别为0.0634±0.0265，0.0761±0.0349，0.0868±0.0204和0.1002±0.0245较PBS0.0577±0.0152呈递增的趋势，而应用2000，4000mg/LCsA滴眼液时，AQP3的表达则较1000mg/LCsA滴眼液无明显差异。对照组小鼠及应用

6、500mg/LCsA滴眼液点眼的实验组小鼠角膜上皮均在创伤后24～30h内完成修复过程，损伤后6h实验组与对照组愈合面积比较无统计学差异，而损伤后12，18，24h实验组与对照组愈合面积比较均有显著统计学差异（P＜0.05，表1）。小鼠损伤角膜上皮在500mg/LCsA滴眼液点眼后各时间点AQP3的表达均较对照组有显著性差异（P＜0.05，表1）。表1小鼠角膜上皮损伤和AQP3表达（略）　　3　讨论　　角膜上皮细胞层于外胚叶，厚约50μm，由5～6层细胞所组成。上皮细胞层为复层上皮，细胞分为3种：基底细胞、翼状细胞、表层细胞

7、。基底细胞层为一单层细胞，位置最深，细胞的底部紧接前弹力层，细胞的顶部与翼状细胞连接。免疫组化表明，AQP3表达于正常小鼠及各组角膜上皮基底细胞层，呈棕黄色颗粒状。角膜上皮损伤后，面积较小的上皮缺损，可以在24h内修复；面积较大时，所需时间较长。随着分子生物学和细胞化学的进展，人们对角膜创伤修复过程的了解也越来越深入。业已证明其损伤修复过程是极其复杂的，是由多种细胞和众多细胞因子在时间和空间高度协调而完成的。水通道蛋白是存在于动植物及微生物细胞膜上转运水的特异孔道,它介导着不同类型细胞膜的跨膜水转运。目前已从哺乳动物的组织中

8、鉴定出11种水通道蛋白,统称“aquaporins,AQPs”。AQPs分布于多个组织器官，在眼结膜的上皮细胞、杯状细胞和腺样层，角膜上皮及内皮层含有丰富的AQP3。AQP3的上调可以增加水和甘油的转运，保证了角膜上皮愈合过程中的能量代谢需要。Levin等[1]证明AQP3在角膜上皮甘油和