外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响论文

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1、外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响论文丁建中，张六通，李军川，胡利群，张燕翔【摘要】目的观察外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法60只SPF级昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组、凉燥组，每组15只。图像分析免疫组化法之各组第6天、第12天，第18天小鼠肺组织AQP1阳性表达率。结果各组AQP1阳性表达部位多在肺泡上皮处;温燥组第12天、第18天AQP1蛋白表达阳性率持续下降，凉燥组也呈同样趋势.freelice.Methods60Kunmingmice(SPF)al)，g

2、roupB(normaltemperatureandexternaldryness),groupC(-Dry),groupD(Cool-Dry),15miceineachgroup.TheexpressionofAQP1embraneedgesofalveoli,andthepositiveratesofAQP1ingroupCandDarkablylomationsoflung.ConclusionThedeareaseofAQP1expressionisrelatedageofalveoliinexte

3、rnaldryness.Key)、D-葡萄糖醛酸内酯(2711EC，Sigam)，其余试剂均为分析纯。1.2动物无特定病原体级(SPF)昆明种小鼠60只，体质量(17±1)g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2008-2005。2方法2.1动物分组与造模60只昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组和凉燥组，每组15只，置人工气候箱内常规饲养，按文献造模4。处理后第6天、第12天、第18天检测相关项目。小鼠实验前4h常规禁食、禁水。2.2普通病理组织学观察断颈处死小鼠，取

4、右肺中叶组织2cm×2cm，常规HE染色，镜检。2.3AQP1蛋白表达检测采用免疫组织化学法。取各组第6天、第12天、第18天小鼠右肺组织(0.5cm×0.5cm)，常规固定、包埋切片，微波法热修复抗原，依次滴加羊抗鼠AQP1多克隆抗体、生物素化兔抗羊二抗和SABC，DAB显色，苏木素衬染、透明封片。光镜下以肺泡周围及肺泡上皮出现棕色颗粒为阳性，JEDA80ID图像分析软件计算AQP1阳性表达“平均灰度”与“异形指数”，并按下式计算：AQP1表达阳性率(%)=肺组织AQP1阳性染色面积/肺组织总面积×100

5、%2.4统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS13.0软件，资料之间比较用ANOVA分析，显著性检验采用多个样本均数间q检验(Nean-Keuls法)，P0.05认为差异有统计学意义，检验水准为双侧α=0.05。3结果3.1病理观察常温常湿组各期无异常，常温燥组第12天肺部轻度充血;温燥组、凉燥组第6天肺泡充血、肺泡隔增厚与炎性细胞浸润，第12天、第18天肺泡瘀血加重，伴明显肺气肿现象，肺泡隔处明显增厚伴炎性细胞浸润，凉燥组肺泡纤维素沉积现象较其他组严重。3.2外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表

6、达的影响见表1。3.3外燥对鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达“平均灰度值”的影响见表2。4讨论三维晶体学方法证实，哺乳动物AQP1通道管上His182、Arg197、Phe58和Cys1914个氨基酸残基构成的狭口恰好是一个水分子的大小，1个AQP1分子每秒钟允许30亿个水分子通过。成人每侧肺内约有3~4亿个肺泡，肺泡Ⅰ型细胞覆盖93%的肺泡表面，肺泡Ⅱ型细胞功能之一是合成与分泌表面活性物质，参与保持肺间质水分恒定和肺泡处于相对湿润状态。Song等采用免疫组化染色技术发现，AQP1可表达于肺泡Ⅱ型上皮细

7、胞顶膜面，免疫电镜显示肺泡Ⅰ型细胞的腔膜面及基侧膜面、肺泡Ⅱ型细胞微绒毛表面呈高电子密度阳性反应。实验证实AQP1基因剔除小鼠肺泡毛细血管间水渗透性较野生型小鼠低10倍;小鼠肺部病毒感染后明显肺水肿时，肺泡AQP1表达明显减少，肺水肿减轻则有所恢复，提示AQP1减少可能是水肿液肺间质聚集的主要原因5。本结果显示，AQP1蛋白阳性表达多在肺泡上皮和肺泡膜缘，与文献报道相符。常温常湿组第6天、第12天与第18天肺组织AQP1表达阳性率相对恒定，常温燥组第12天、第18天下降(P0.01)，凉燥组也呈同样趋势。温

8、燥组第6天AQP1表达变化不明显，但第12天、第18天则持续下降，提示第6天AQP1为代偿性增加以维持肺局部之水液转运功能;但随病程延长其代偿功能随之减弱，并与同期该组肺组织之明显病理改变相关。表1外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响表2外燥对小鼠肺组织AQP1表达“平均灰度值”的影响数字图像的灰度值是某一点的亮度或色彩在给定亮度或色彩序列中次序的数值，观测“平均灰度值与”异形指数“以辅助了解AQP1在肺组织的