地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺水通道蛋白1的影响

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1、地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺水通道蛋白1的影响作者：吴葆菁，李文益，檀卫平，麦贤弟，黄花荣，李静【摘要】【目的】观察水通道蛋白1(AQP1)在急性过敏性哮喘小鼠肺组织的改变，以及地塞米松对其的影响。【方法】建立小鼠哮喘模型，并随机分为3组，哮喘模型组、生理盐水对照组和治疗组，治疗组在激发阶段给予地塞米松治疗。检测各组中支气管肺泡灌洗液（BALF）的白细胞总数、分类计数以及IL-5和IFN-γ水平，用RT-PCR、Westernblot和免疫组化法检测AQP1mRNA、蛋白质水平和在肺组织的分布，观察肺组织形态学改变。【结果】(1)哮喘组BALF中白细胞总数［（52±8）×106/mL］

2、、嗜酸性粒细胞数［（9.8±1.7）×106/mL］和IL-5水平［(71±27)pg/mL］均高于对照组(P均<0.01)，IFN-γ水平［(294±26)pg/mL］低于对照组(P<0.05)，治疗后白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均明显下降(P<0.05，P<0.01，P<0.01)，IFN-γ水平明显上升(P<0.05)；（2）哮喘组AQP1mRNA（1.90±0.29）和蛋白质（1.31±0.10）明显高于对照组(P均<0.01)，治疗后表达明显下降(P<0.01，P<0.05)；13(3)哮喘组肺组织可见较弥漫的炎

3、性改变，黏液分泌增多，血管壁水肿明显，血管周围有大量的炎症细胞渗出物，治疗组形态学改变明显减轻；AQP1在气管黏膜上皮、微血管内皮上皮、支气管周围血管床、炎症细胞呈阳性表达，哮喘组表达呈强阳性，治疗后表达明显减弱。【结论】AQP1在急性哮喘小鼠肺组织内过度表达，地塞米松对其有显著的抑制作用，可明显改善小鼠肺部的炎性浸润和肺水渗出的病理生理过程。【关键词】过敏性哮喘；水通道蛋白1；地塞米松；白细胞介素5；干扰素γ水通道蛋白1(aquaporin-1，AQP1)是20世纪80年代末Agre［1］发现的第一个水通道蛋白。AQP1在人体内分布广泛，存在于不同的组织器官中。AQP1表达和功能异常与

4、某些疾病的分泌增多、水肿及变应反应密切相关［2-4］，如脑水肿、肾病、变应性鼻炎等。AQP1是肺组织主要的水通道蛋白，是肺组织水转运功能中液体快速转运的通道，对于维持正常肺组织的通气和换气功能起重要用，现已公认水分子运动在哮喘发作时的气道阻塞中起重要的作用。但气道AQPｓ在的哮喘病理生理过程中的作用研究甚少，国内尚未见有关AQPs在哮喘中的作用的研究。本文通过实验观察AQP1在急性过敏性哮喘小鼠肺组织表达的改变，以及地塞米松对其的影响。１材料与方法1.1实验动物13雌性C57BL/6小鼠30只，清洁级，5～6周龄，体质量15～20(18±8)g，由中山大学实验动物中心提供。1.2实验材料

5、鸡卵白蛋白(ovalbuminOVA，GradeV，Sigma，美国)，Trizol（Invitrogen，America），逆转录试剂盒、Taq酶（MBIFermentas，America），小鼠IL-5、干扰素-γ(IFN-γ)酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒、兔抗鼠AQP1多克隆抗体、生物素标记的羊抗兔链霉亲合素生物素酶复合物（武汉博士德工程有限公司），PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成。1.3实验方法1.3.1动物分组30只C57BL/6小鼠随机分为3组，分别为OVA致敏/激发组（哮喘组）、生理盐水对照组（对照组）、地塞米松(dexamethasone，DM)治疗组（D

6、M组），每组10只。1.3.2急性哮喘动物模型建立急性哮喘动物模型的建立:方法采用国外文献［5］的方法加以改进，哮喘组、DM组分别于当天及第14天腹腔注射新鲜配制的1g/LOVA与100g/L氢氧化铝混悬溶液0.2mL(1g/LOVA0.1mL+100g/L氢氧化铝0.113mL)致敏，在21、22、23、29和30d予1g/LOVA溶液50μL滴鼻吸入激发哮喘，小鼠出现烦躁不安或安静少动、呼吸加深加快，弓背，前肢缩抬、腹肌痉挛等阳性反应；DM组在2l、22、23、29和30d滴鼻激发前30min予地塞米松1.2mg/kg腹腔注射；对照组同时给予相同体积生理盐水腹腔注射及滴鼻。1.3.3

7、标本采集最后1次滴鼻吸入激发后24～48h，麻醉小鼠，剪开颈部皮肤，暴露气管、分离气管，经气管缓缓插入套管针，结扎固定，用1mL注射器吸取0.6mL磷酸盐平衡溶液（PBS），通过套管将PBS缓慢注入肺内，缓慢回抽，反复3次，收集全部支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlarvagefluid，BALF）1.0～1.2mL，回收率>80%。取0.1mLBALF于血细胞计数板中计算细胞总数，其余BALF离心(1500r