环孢素a滴眼液对损伤角膜上皮水通道蛋白3表达的影

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1、环孢素A滴眼液对损伤角膜上皮水通道蛋白3表达的影【摘要】  目的:环孢素A(CyclosporinA,CsA)滴眼液在小鼠角膜上皮愈合过程中上调水通道蛋白3(aquaporinprotein3,AQP3)表达的作用机制。方法:采用机械法刮除小鼠角膜上皮的方法建立模型,观察角膜上皮修复情况。取角膜行AQP3免疫组化染色,观察AQP3表达。结果:角膜上皮基底细胞层可见AQP3的表达。应用125,250,500,1000mg/LCsA滴眼液点眼后AQP3的表达呈递增趋势。角膜上皮损伤后用500mg/LCsA滴眼液点眼,损伤后6h实验组与对照组愈合面积比较无统计学差异,而损伤后12,18,24h比较均

2、有显著统计学差异(P<0.05)。结论:应用500mg/LCsA滴眼液点眼,可通过增加AQP3表达而加快小鼠角膜上皮损伤的修复。【关键词】环孢素A;角膜上皮;创伤修复;AQP3  AbstractAIM:Tolearntheupregulationofaquaporinprotein3(AQP3)expressioninthecornealepithelialhealingprocessofmicebycyclosporinA(CsA)eyedrops.METHODS:Modelsechanicalcurettagemethodofcornealepitheliuminmicetoobse

3、rvetherepairofcornealepithelium.CorneasmunohistochemicalstainingtoobservetheexpressionofAQP3.RESULTS:AQP3expressioncouldbeseeninthebasalcelllayerofthecornea.Afterapplicationsof125,250,500,1000mg/LCsAeyedrops,theAQP3expressioninjuryg/LCsAeyedrops,thereentalgroupandcontrolgroup6hoursafterinjury,g/LCs

4、AeyedropscanacceleratemicecornealepithelialdamagerepairbyincreasingtheexpressionofAQP3.  KEYm直径的环钻在角膜中央标记创伤区,机械法刮除标记区内的角膜上皮。  1.2 方法  将35只小鼠随机分为7组,分别于角膜上皮损伤后接受PBS及125,250,500,1000,2000,4000mg/LCsA滴眼液点眼,1滴/次,每3h1次,共12h。60只小鼠随机分为两组,去角膜上皮后,20g/L荧光素钠染色,即刻照相1次。对照组滴PBS,实验组滴500mg/LCsA后分别于6,12,18,24,30h,20

5、g/L荧光素钠染色后照相,观察角膜上皮修复情况,脱颈椎处死,取角膜,进行AQP3免疫组化染色,光镜下观察AQP3表达情况,并应用图像分析软件进行量化。用不规则面积软件分析,测得修复速率。以0h创伤面积为100%,后续各时间点以其未修复区面积与0h创伤面积相比所得百分数来衡量其修复情况。  统计学分析:采用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析,实验数据以±s表示,采用两样本t检验,P<0.05为差异有显著意义。  2 结果  角膜上皮基底细胞层可见AQP3的表达,呈棕黄色颗粒状,上皮表层及基质无表达。小鼠角膜上皮损伤12h后,应用125,250,500,1000mg/LCsA滴眼液点眼,角膜

6、上皮免疫组化AQP3的表达单位面积IOD值分别为0.0634±0.0265,0.0761±0.0349,0.0868±0.0204和0.1002±0.0245较PBS0.0577±0.0152呈递增的趋势,而应用2000,4000mg/LCsA滴眼液时,AQP3的表达则较1000mg/LCsA滴眼液无明显差异。对照组小鼠及应用500mg/LCsA滴眼液点眼的实验组小鼠角膜上皮均在创伤后24~30h内完成修复过程,损伤后6h实验组与对照组愈合面积比较无统计学差异,而损伤后12,18,24h实验组与对照组愈合面积比较均有显著统计学差异(P<0.05,表1)。小鼠损伤角膜上皮在500mg/LCsA滴

7、眼液点眼后各时间点AQP3的表达均较对照组有显著性差异(P<0.05,表1)。表1小鼠角膜上皮损伤和AQP3表达(略)  3 讨论  角膜上皮细胞层于外胚叶,厚约50μm,由5~6层细胞所组成。上皮细胞层为复层上皮,细胞分为3种:基底细胞、翼状细胞、表层细胞。基底细胞层为一单层细胞,位置最深,细胞的底部紧接前弹力层,细胞的顶部与翼状细胞连接。免疫组化表明,AQP3表达于正常小鼠及各组角膜上皮基底细

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