纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘形成相关蛋白表达的影响

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1、纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘形成相关蛋白表达的影响：陈静黄秋生,窦毅宗海洋，崔颜宏庄琴孙湘兰龚爱华，张志坚【摘要】目的：探讨纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘相关蛋白表达的影响。方法：将体外培养的成人鼻粘膜嗅鞘细胞种植于纤维蛋白支架，用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照底物，培养14天后用扫描电镜观察细胞的形态学变化并对细胞内髓鞘形成相关蛋白2,3环核苷3磷酸二酯酶（2′,3′cyclicnucleotide3′phosphodiesterase，Pase）和髓鞘碱性蛋白（myelinbasicprotein，MBP）进行免疫荧光染色定位和免疫印迹半定量测定，分

2、析纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞Pase和MBP表达的影响。结果：人嗅鞘细胞种植于纤维蛋白支架后，其形态为长条带状，细胞成束排列，方向一致。细胞内Pase和MBP表达水平明显高于对照组。结论：纤维蛋白支架与人嗅鞘细胞具有很好的生物相容性并可促进细胞表达髓鞘相关蛋白Pase和MBP；将该组织工程支架用于移植治疗脊髓损伤，有利于再生神经纤维的髓鞘形成。【关键词】人嗅鞘细胞；组织工程支架；纤维蛋白（原）；2,3环核苷3磷酸二酯酶；髓鞘碱性蛋白［Abstract］Objective:Toinvestigatetheeffectsoffibrinscaffoldon

3、themyelinassociatedproteinsexpressionofthehumanolfactoryensheathingcells(hOECs)derivedfromolfactorymucosa.Methods：ThehOECsentalgroupandtheglassslidesmodifiedorphofthehOECsicroscopy.Toinvestigatetheeffectsoffibrinscaffoldonthemyelinassociatedproteinsexpression,thehOECsmunofluoresc

4、encestainedyelinbasicprotein(MBP).TherelativecontentsofPaseandMBPent.SomehOECshadmigratedintothescaffolds.TheresultsofimmunofluorescencestainingandBPofhOECsgreoteexpressionsofPaseandMBPinthehOECsseededinthescaffold.ThetissueengineeringposedofhOECsandfibrincouldbeusedforimplantati

5、ontorepairtheinjuredspinalcord.［Keyanolfactoryensheathingcells(hOECs);tissueengineeringscaffold;fibrin/fibrinogen;2′,3′cyclicnucleotide3′phosphodiesterase(Pase);myelinbasicprotein(MBP)现有研究资料表明，嗅鞘细胞（olfactoryensheathingcells，OECs）移植修复脊髓损伤可促进实验动物的神经再生和改善后肢运动功能［1,2］。临床试验结果亦显示OECs移植治

6、疗脊髓损伤具有良好的应用前景［3-6］。成人鼻黏膜OECs因取材方便，可用于自体移植，对其生物学特性及与支架材料的生物相容性进行研究具有更重要的实用价值［7］。我们在前期的研究中发现，大鼠鼻腔嗅黏膜OECs在纤维蛋白支架上生长良好［8］。但是，成人嗅黏膜OECs与纤维蛋白的生物相容性如何，尤其是纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞（humanolfactoryensheathingcells,hOECs）髓鞘形成相关蛋白的表达有何影响，仍不清楚。本研究将体外培养的成人嗅黏膜OECs种植于纤维蛋白(fibrin,Fb)支架，用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照底物，观察纤维

7、蛋白支架对hOECs的形态及其2,3环核苷3磷酸二酯酶（2′,3′cyclicnucleotide3′phosphodiesterase，Pase）和髓鞘碱性蛋白（myelinbasicprotein，MBP）表达水平的影响，以探讨hOECs/纤维蛋白支架移植入脊髓损伤部位对再生神经纤维髓鞘形成的影响，为进一步评价hOECs/纤维蛋白支架移植修复脊髓损伤的可行性提供实验研究资料。1材料和方法1.1嗅黏膜的活体取材和细胞培养嗅黏膜取自健康男性自愿者，42岁。消毒面部皮肤和鼻腔，鼻黏膜局部麻醉，在无菌条件下用鼻窦内窥镜自一侧上鼻甲钳夹0.5cm×0.5c

8、m嗅黏膜。嗅黏膜取出后用DMEM/F12（v/v=1∶1，pH=7.3）培养基(