2_氯三苯甲基氯树脂的制备及其在多肽固相合成中的应用

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1、第9卷第3期过程工程学报Vol.9No.32009年6月TheChineseJournalofProcessEngineeringJune20092-氯三苯甲基氯树脂的制备及其在多肽固相合成中的应用1,21,211李鹏，梁洪，张竞，苏志国(1.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京100190；2.中国科学院研究生院，北京100049)摘要：以2-氯二苯甲酮为原料，与PCl5在130∼140℃下加热合成1-氯-2-二氯苯甲基苯作为前体，与粒径小于30µm的1.5%二乙烯苯交联聚苯乙烯树脂进行Friedel−Crafts烷基化反应，所得2-氯

2、三苯甲基醇用亚硫酰氯进行氯化处理，得到2-氯三苯甲基氯树脂.该制备方法简便易行且无需使用有机金属试剂，所得2-氯三苯甲基氯树脂首位氨基酸上载率和溶胀性质均优于同类树脂商品，使用该树脂合成的困难序列酰基载体蛋白65-74的固相合成收率为72%，产物纯度达到76.5%.关键词：2-氯三苯甲基氯树脂；多肽固相合成；聚苯乙烯树脂中图分类号：O636；TQ464.7文献标识码：A文章编号：1009−606X(2009)03−0558−051前言本研究采用2-氯二苯甲酮作为原料，通过简便的氯多肽的全化学合成分为液相和固相合成，固相多肽化方法制得1-氯-2-二氯苯甲基

3、苯{1-Chloro-2-合成(SolidPhasePeptideSynthesis,SPPS)法自1963年由[dichloro(phenyl)methyl]benzene,DCPB}作为前体，再与Merrifield[1]创立以来，因其操作简便、副产物少、纯化聚苯乙烯进行Friedel−Crafts烷基化反应，在树脂上得效率高等优点，被越来越多地用于生物活性肽类的研究到2-氯三苯甲基醇(2-Chlorotritylalcohol,2-CTA)，然后开发，特别是广泛用于药用短肽的实际生产中[2].在多通过氯化反应得到2-CTC树脂(图1).该方法反应条

4、件肽固相合成中，2-氯三苯甲基氯(2-Chlorotritylchloride,温和，处理过程易操作且无需使用有机金属试剂，仅用2-CTC)树脂因反应条件较其他树脂更温和[3]、能有效抑3步得到2-CTC树脂.采用MS,NMR,FT-IR,SEM等方制外消旋作用及二酮哌嗪生成等副反应的发生[4−6]、产法对DCPB和2-CTC树脂进行检测，通过对所制树脂物纯度高等优点，已应用于多种多肽药物如细胞融合酶的溶胀性质、首位氨基酸上载率及多肽固相合成效率的抑制肽T20和T1249等的工业化生产[7,8].此外2-CTC检测考察其应用性能.采用该方法制备的小粒径2

5、-CTC树脂还可用于羧酸、醇和硫醇的固相合成[9]，广泛的用树脂的多肽固相合成载体性能达到相应商品化树脂的途和优良的性能决定了其不再只是实验室常用的合成水平，为安全简便地进行2-CTC树脂的大规模生产奠定载体，而将逐渐成为大批量使用的生产用载体树脂.了一定基础.目前在聚苯乙烯载体上引入2-CTC结构的方法主要有3种，一是通过碘代苯聚合物和正丁基锂衍生得到Reflux锂−苯聚合物，再由锂−苯聚合物与苯甲酮反应生成三苯130~140℃甲基聚合物[10]；二是先由聚苯乙烯树脂和苯甲酰氯通过DCPBFriedel−Crafts酰化反应得到苯甲酮衍生聚合物，再通过

6、有机锂试剂将苯甲酮衍生聚合物转化为三苯甲基聚合[11]物；另外，也可以将三苯甲基直接连接到Merrifield树脂上，但该方法需先在溶液状态下用有机金属试剂制备三苯甲基醇作为连接前体[12].除此之外，通过三苯甲Polystyrene2-CTAresin2-CTCresin基化单体聚合制备2-CTC树脂需要使用格氏试剂或有[13,14]图1无金属有机物的2-CTC树脂制备路线机锂试剂.上述方法步骤较复杂且均需使用有机金Fig.1Preparationof2-chlorotritylchlorideresinwithout属试剂，反应操作条件、试剂成本及废

7、料的处理都可能organometallicreagents会成为2-CTC树脂规模化生产中较难解决的问题.收稿日期：2009−03−19，修回日期：2009−04−09基金项目：国家高技术研究发展计划(863)基金资助项目(编号：2007AA021604)作者简介：李鹏(1983−)，女，土家族，河北省石家庄市人，硕士研究生，生化工程专业；苏志国，通讯联系人，E-mail:zgsu@home.ipe.ac.cn.第3期李鹏等：2-氯三苯甲基氯树脂的制备及其在多肽固相合成中的应用559水洗2次后用MgSO4干燥，过滤滤液经减压浓缩得到2实验4.97g黄色油

8、状液体，DCPB合成反应的收率为92%.2.1材料与试剂RP-HPLC分析产物纯