甾体1,4-脱氢和11α-羟基化反应的两种不同微生物转化

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%%年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-./-01-2$%%%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!甾体!，"#脱氢和!!!#羟基化反应的两种不同微生物转化徐诗伟徐清"法幼华（中国科学院微生物研究所北京!%%%4%）关键词节杆菌，犁头霉，多步转化反应，!"!3甲基3!!"，!5"，$!3三羟基孕甾3!，63二烯37，$%3二酮中图分类

2、号84!#文献标识码9文章编号!%%%37%"!3（$%%%）%#3%"#!3%7采用两种不同的微生物进行连续的或混合的转化，对甾C，按6H种量移入含#%%0F培养基7F三角瓶，待菌生长好体化合物进行多步反应，已有不少关于:脱氢和!!（"或后投加适量氯化钴溶液以抑制甾核的降解，并加入底物进行;!!）3或!""3羟基化的报道。它可减少中间产物的分离步骤，起转化。到简化工艺，降低生产成本的效果，有时还可抑制不需要的!*&*%犁头霉转化#：取土豆汁斜面孢子接种含6%0F培副反应的产生，促进所需产物的形成

3、［!#6］。本工作以来自梯养基$#%0F三角瓶，$4G，!4%2／0=?振荡培养$6C，然后移可吉宁（<=>(>-?=?）的!"!3甲基37!，!5"，$!3三羟基3#"3孕甾3至含6%%0F培养基7F三角瓶，待菌丝体生长好后投加%作$%3酮3$!3醋酸酯（@）作为底物，采用微生物转化方法制备为底物，转化条件与培养相同。!"!3甲基3!!"，!5"，$!3三羟基孕甾3!，63二烯37，$%3二酮（$），!*&*&节杆菌和犁头霉连续转化：节杆菌和犁头霉培养均$是合成高效肾上腺皮质激素倍他美松（A-/

4、B0-/CBD(?-）类在含6%%0F培养基7F三角瓶中进行，转化时先将氯化钴溶药物的重要前体［#］。在转化过程中，要求微生物既能氧化底液和底物加入至已培养好的节杆菌发酵液中，然后待脱氢反物的:羟基为酮基，并在:和:上同时引入两个双键，应进行到一定程度时，再将已生长好的犁头霉菌丝体（过滤;7;!;6又能实施:羟基化和:醋酸酯水解。国外采用化学法收集）加入，继续转化直至底物完全消失。;!!;$!脱氢，然后用霉菌引入!!"3羟基。我们在过去研究［"，5］的基!$"分析方法础上，又筛选到:脱氢能力很强的

5、节杆菌（3*/"*(4+0/%*取适量转化液用等量醋酸乙酯抽提，提取液进行色谱分析。!，6&56）9E4"，用它和一株具有!!"3羟基化能力的犁头霉（347!*"*!硅胶

6、量分析：根据峰高值以外标法测定%!材料和方法［4］和$的转化情况，色谱条件同前报道。!$!菌种!*’中间产物和产物的提取与鉴定节杆菌9E4"和犁头霉9$4均由筛选得到，分别在牛肉［5］；$提取是将转化后发酵液过%提取与鉴定同前报道汁和土豆汁琼脂斜面上保存，液体培养基按前报道［"，4］配制。滤除去菌丝，滤液用醋酸乙酯提取，提取液减压浓缩，残余物!$%甾体化合物用溶剂洗涤即得产物，乙醇重结晶得分析样品，进行熔点，比!"!3甲基37!，!5"，$!3三羟基3#"3孕甾3$%3酮3$!3醋酸酯旋值，元素分

7、析和波谱等各项物理性质测定，以确认其化学（底物，@）和!"!3甲基3!5"，$!3二羟基孕甾3!，63二烯37，$%3二结构。酮（中间产物，%）由东北制药总厂提供；样品!"!3甲基3!!"，%实验结果!5"，$!3三羟基孕甾3!，63二烯37，$%3二酮（产物，$）由美国先令制药公司赠送。%$!节杆菌转化"!$&培养和转化用$个7F三角瓶，&的投加浓度为%K7H（9／:），总量!*&*!节杆菌转化"：取牛肉汁斜面生长好节杆菌接种含7K%>，转化5$C，合并发酵液经提取得中间产物（%）$K!7>，6

8、%0F培养基$#%0F三角瓶，7%G，$%%2／0=?振荡培养$60.$%$#$%#G，收率4%K#H。正己烷3丙酮重结晶得分析样收稿日期：!&&&3!!3!&，修回日期：$%%%3%"3$%。"现在北京诺和诺德生物技术中心工作。生物工程学报*1卷1(#品!"#$%&’!#$(&$)；［"］*+（0，$&1#’；2345678）；*$=M，L**，*#(=M，**’D=），’&’$（#=，NA，L*+=M，0#*D,-*$./’’9:#;8<=（7!）#’’（$*1$$$）；>?%