犁头霉11α-羟基化制备16β-甲基-11α,17α,21踩羟基孕甾-1,4捕烯3,20捕酮

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%%年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-).$%%%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!犁头霉!!!"羟基化制备!#""甲基"!!!，!$!，%!"三羟基孕甾"!，&"二烯"’，%("二酮徐诗伟徐清"法幼华（中国科学院微生物研究所北京!%%%1%）摘要选育到一株对!"!0甲基0!&"，$!0二羟基孕甾0!，#0二烯02，$%0二酮（#3）!!"0羟基化活性强的犁头霉4$1菌株，并发现底物$!0乙酰化（#5）可明显提高!

2、!"0羟基化的能力。在适宜的转化条件下，#5投料浓度%678，产物!"!0甲基0!!"，!&"，$!0三羟基孕甾0!，#0二烯02，$%0二酮（$）收率为&28，结构经波谱分析确认。关键词犁头霉，!!"0羟基化，!"!0甲基0!!"，!&"，$!0三羟基孕甾0!，#0二烯02，$%二酮中图分类号91!7文献标识码4文章编号!%%%02%"!（$%%%）%#0%#1$0%2!"!0甲基0!&"，$!0二羟基孕甾0!，#0二烯02，$%0H／F>A振荡培养$#I，以!%8（8／8）接种量移入新二酮（#3）或其$!0醋酸酯（#5）可用一步微生物法，鲜培养基，待二级菌丝生长好后投加预先用乙醇

3、溶或用常规的多步化学法由相应的化合物!"甲基0解的底物，继续在相同培养条件进行转化。!02!，!&"，$!0三羟基07"0孕甾0$%0酮0$!0醋酸酯（%）经!)’分析方法氧化和:脱氢作用制备［!&2］。然后继续产物转化率的测定采用DJB:法，取一定量发4环:;2!，#在:环上引入!!"0羟基，现均采用微生物法，使用酵转化液用$倍体积醋酸乙酯萃取，待酯层澄清后，的微生物常为霉菌［#，7］。我们曾用节杆菌取$进样，使用K>)L(ADJB:仪，’B’0M(AN3E3O:!1（3*/"*(4+0/%*&56）4<1"一步微生物转化来源于梯柱，流动相甲醇：水（"%：#%），流量!FB／F>A

4、；P’可吉宁（=>?(?@A>A）的中间体（%）得到#3，再由犁头$7#AF检测，用峰高值以外标法定量。在测定标准霉（34#+&56）4$1!!"0羟基化得到产物!"!0甲基样品%62&$6&’?／’B浓度范围内与峰高值有良好0!!"，!&"，$!0三羟基孕甾0!，#0二烯02，$%0二酮（$），的线性关系。$是合成倍他美松类药物的重要前体。本文主要报!)&产物提取道犁头霉4$1!!"0羟基化作用的底物选择以及转化转化终止，滤出菌丝体用水洗涤，洗液与滤液合#5的条件研究。并，用醋酸乙酯提取2次，提取液置旋转蒸发器减压浓缩除去溶剂，残余物用少量氯仿洗涤即得产物，经!材料和方法乙醇

5、重结晶后进行物理性质测定。!)!菌种和培养基霉菌以土豆汁琼脂斜面保存。液体培养基组成%结果与讨论为（?／B）：葡萄糖!%，玉米浆!7，黄豆饼粉2，自来水%)!几株霉菌!!!"羟基化能力的比较配制，!%8+3CD溶液调至ED"6#，$7%FB三角瓶装表!对几株具有!!0羟基化能力的霉菌转化底#%FB培养基，2B三角瓶装#%%FB培养基，!!$6"G物（#3）生成产物（$）进行了比较。由此可见，犁头湿热灭菌$%F>A。霉4$1对底物!!"0羟基化能力最强，且生成副产物!)%培养与转化!!!0羟基异构体量也甚少，故为一株较为理想的取土豆汁斜面上生长好的霉菌用无菌水洗下其!!"0羟基化菌。孢

6、子，然后接到盛有培养基的三角瓶中，$1G，!1%收稿日期：!///0!!0!/，修回日期：$%%%0%#0$%。"现在北京诺和诺德生物技术中心工作。;期徐诗伟等：犁头霉--".羟基化制备-K#.甲基.--"，-J"，<-.三羟基孕甾.-，;.二烯.:，<5.二酮;9:表!霉菌!!!"羟基化能力的比较达到@A时，羟化酶活性明显受到抑制；而JA乙醇#$%&’!($)$%*&*+,-.!!!"/,01-2,&$+*-3%,转化几乎不能进行。这一结果表明，潜溶剂的使用4’5’1$&.637*4+1$*34不仅可改善亲脂性甾体底物的弱水溶性，促进转化(#)*+,"（!）!%*23#)*+,"!

7、+4’"#$"2有利于合成方向；但也由于其混溶性常会引起酶活!"#$%&’（--"./0*#)10）（--#./0*#)10）（$$）性的降低，因此溶剂用量必须严格控制［K］。!"#$%&’(()"*+,%-+$)"56788777表;溶剂对!!!"羟基化的影响.,’/*#)"0’&%’+-0"59788777#$%&’;<..’=+-.=-4-&5’3+4-3!!!"/,01-2,&$+*-31)%2)(-%’-()0-3-!4:5;:9-887777B