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1、生物技术通报·综述与专论·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2008年第4期基因工程菌中重组质粒的稳定性研究进展肖硕洪华珠彭建新(华中师范大学昆虫学研究所,武汉430079)摘要:基因工程菌(细胞)是现代生物工程中的微型生物反应器,是基因工程的研究主体之一。获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞是基因工程的核心步骤与最终目的。基因工程菌重组质粒稳定性问题是基因工程菌工业化生产与实验研究中的最主要问题,就其在基因工程中的重要性、影响因素及提高稳定性策略方面作简要介绍并展开综述。关键词:基因工程重组质粒稳定性策略ResearchProgressonPla
2、smidStabilityinRecombinantXiaoShuoHongHuazhuPengJianxin(InstituteofEntomologyCentralChinaNormalUniversity,Wuhan430079)Abstract:Recombinantissubminiaturebioreactorinmodernbiologicalengineeringandoneofprincipalpartofgeneengineering.Toobtainsteadyheterologousgeneproductisthehardcorestepa
3、ndfinalaim.Plasmidstabilityofrecombinantisthemostimportantproblemofindustrializedproductionandexperimentresearch.ThearticleintroducedandSummarizeditsimportance,influencingfactors,improvingstrategies.Keywords:GeneengineeringPlasmidofrecombinantStabilityStrategy狭义的基因工程即重组DNA技术,其基本过(Esch
4、erichiacoli)、酿酒酵母等。在重组基因工程菌程主要包括以下的5个方面:l)从供体细胞中分离培养过程中,遇到的主要问题有:l)有机酸类代谢出基因组DNA,用限制性核酸内切酶分别将外源副产物积累并抑制菌体生长和产物的表达;2)大规DNA(包括外源基因组和目的基因)和载体分子切模及高密度培养过程的供氧限制;3)外源基因高表开(简称切);2)用DNA连接酶将含有外源基因的达引起宿主细胞生理负担过重;4)质粒不稳定性问DNA片段接到载体分子上,形成DNA重组分子题。其中,质粒的稳定性研究尤为重要,对于一定结(简称接);3)借助于细胞转化手段将DNA重组分构的基因工
5、程菌而言,提高质粒的稳定性对于基因子导入受体细胞中(简称转);4)短时间培养转化细产物的生产及科学研究具有重要意义,就基因工程胞,以扩增DNA重组分子或使其整合到受体细胞菌中影响质粒稳定性的因素及提高稳定性的策略的基因组中(简称增);5)筛选和鉴定转化细胞,获展开综述。得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞1质粒不稳定性的定义及类型(简称检)。作为现代生物工程的关键技术,基因工重组质粒的不稳定性,是指重组菌在培养过程程的主体战略思想是外源基因的稳定高效表达,基中发生突变或丢失,结果使重组菌失去了原有的表因工程菌(细胞)即是现代生物工程中的微型生物型特征。依据重
6、组质粒的变化本质,质粒不稳定性反应器。可分为结构不稳定性、分离不稳定性。质粒的结构用于重组DNA技术中的宿主细胞既有原核生不稳定主要是由于DNA的插入、缺失或重排等引物,又有真核生物,典型的宿主细胞如:大肠杆菌起的不稳定,使目的基因功能丢失,但对质粒主要收稿日期:2007-12-17作者简介:肖硕(1974-),女,主管药师,在读研究生,研究方向:农业害虫与生物防治通讯作者:洪华珠,电子信箱:hzhong@mail.ccnu.edu.cn10生物技术通报BiotechnologyBulletin2008年第4期[1][7]遗传标记丢失影响较小。质粒的分离不稳定是细
7、低影响质粒稳定性及人类特异性免疫反应的降低。胞在分裂后分离时引起的不稳定,由于质粒在子代2.3调控突变、培养条件等细胞中的不均匀分配而使部分细胞不含质粒,是质外源基因的调控突变、培养条件及质粒中所携粒丢失的主要原因。质粒的分离不稳定性常出现在带的外源基因性质、重组菌的生长速率、外源基因两种情况,一是传代质粒只在许多世代之后才明显的表达水平等因素都是影响质粒稳定性的因素,有[2]产生丢失;二是带有质粒的细胞与无质粒细胞有些需要在质粒设计和构建时仔细考虑,有些则与培不同的生长速率导致。外源基因载体DNA的存在养过程有关。犹如细胞内存在多拷贝的质粒一样,对宿主是一种3提
8、高质粒稳定
