基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白

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1、第35卷第4期南京理工大学学报Vo1．35No．42011年8月JournalofNanjingUniversityofScienceandTechnologyAug．2011基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白刘斌，郭红丽，钮小松，张小霞，杨树林(南京理工大学环境与生物工程学院，江苏南京210094)摘要：通过响应曲面法(RSM)优化巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115／pPIC9KG6表达高亲水性重组人源胶原蛋白的摇瓶培养条件。采用Box—Behnken设计(BBD)考察初始诱导pH值、温度和甲醇添加量三个主要影响因子对

2、重组人源胶原蛋白表达量的影响，利用DX7Trial软件设计实验方案，根据该方案设置不同培养条件进行实验并测定相关参数。响应面分析确定的最优因素水平组合为：初始诱导pH值为5．0，诱导温度为28℃，甲醇添加量为2．2％／24h。通过响应面法优化发酵的内在因素水平，找出最佳条件，为利用其指导在发酵罐中进行高密度发酵生产人源胶原蛋白奠定基础。关键词：巴氏毕赤酵母；重组人源胶原蛋白；响应曲面法；Box—Behnken设计中图分类号：Q815文章编号：1005—9830(2011)04～0558—05OptimizationofFe

3、rmentationConditionsofGeneticallyEngineeredPichiapastorisExpressingRecombinantHuman—sourceCollagenLIUBin，GUOHong—li，NIUXiao—song，ZHANGXiao—xia，YANGShu—lin(SchoolofEnvironmentalandBiologicalEngineering，NUST，Nanjing210094，China)Abstract：Responsesurfacemethodology(RS

4、M)isusedtooptimizethefermentationconditionsofge-neticallyengineeredPichiapastoris(GS115／pPIC9KG6)expressinghighlyhydrophilicrecombinanthuman—sourcecollagen．Box—Behnkendesign(BBD)isintroducedtoestimatetheimpactofinitialin—ducementpH，temperatureandadditionamountofme

5、thano1．AnexperimentisdonebysettingdifferentcultureconditionsaccordingtotheschemedesignedthroughtheDX7Trialsoftware，andthecorrelationalparametersaredetermined．TheRSManalysisresultshowsthattheoptimalscaleoffactorsis：initialinducementpH5．0，temperature28℃，additionamou

6、ntofmethanol2．2％／24h．Theexperimentofferspreciseconditionsforhighdensityfermentationperformedinfermenter．Keywords：Pichiapastoris；recombinanthuman—sourcecollagen；responsesurfacemethodology；Box-Behnkendesign收稿日期：2010—09-20修回日期：2011-06—10基金项目：国家“863”计划资助项目(2008AA12A21

7、8)；教育部博士点基金(20093219110013)作者简介：刘斌(1971一)，男，博士生，主要研究方向：基因工程技术的应用，E—mail：goldendays2002@126．corn；通讯作者：杨树林(1953一)，男，教授，博士生导师，主要研究方向：微生物代谢调控与基因工程，E—mail：yshulin@mail．njust．edu．an。总第179期刘斌郭红丽钮小松张小霞杨树林基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白559胶原蛋白具有独特的组织结构和生物学特1．2培养方法性，对维护细胞、组织、器官的正常生理功能和

8、1．2．1种子培养损伤修复有重要作用，同时胶原蛋白具有低免从新鲜MD平板上挑取单菌落接种到50mL疫原性、可生物降解、良好的生物相容性和机械BMG培养基中，30cc和250r／min振荡培养过性能等特点，作为生物医用材料广泛应用于医夜，然后接人200mLBMG培养基中继续培养至药、组织工程和化妆品等领域