牛奶中氯霉素及四环素类抗生素的反相高效液相色谱快速测定

《牛奶中氯霉素及四环素类抗生素的反相高效液相色谱快速测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第9卷第3期柳州职业技术学院学报Vol.9No.32009年9月JOURNALOFLIUZHOUVOCATIONAL&TECHNICALCOLLEGESept.2009［理工农学研究］牛奶中氯霉素及四环素类抗生素的反相高效液相色谱快速测定韦文惠（柳州职业技术学院，广西柳州545006）摘要：利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC），在SpherisorbC18柱上以乙腈-0.2g/L氨三乙酸（pH2.5）(体积比20:80)为流动相，柱温35℃，于267nm紫外检测牛奶中残留的氯霉素（CP）、金霉素(CTC)、土

2、霉素(OTC)、四环素(TC)。考查了流动相的组成、流动相pH等因素对分离度的影响。实验条件下，四种抗生素在试验浓度范围内色谱峰面积与浓度呈现良好线性关系，四种抗生素的加标回收率分别为：土霉素为105%，四环素为90%，金霉素为82%，氯霉素为87%；检测限（S/N=3）分别为土霉素为0.35mg/L、四环素为0.30mg/L、金霉素为0.80mg/L、氯霉素为0.70mg/L。方法简单、快速，可用于奶制品中这些抗生素的检测。关键词：HPLC；氯霉素；四环素；金霉素；土霉素中图分类号：O657.7+2文献标志码：

3、A文章编号：1671－1084（2009）03－0077-041前言氯霉素、四环素类抗生素作为广谱抗菌剂，被广泛地应用于各种动物药物和饲料添加剂中，以防治疾病、促进生长，提高饲料转化率[1]。据报道，二十世纪八十年代以来，六成以上的动物饲料中均添加有抗生素[2][2-3]。抗生素的大量使用，导致抗生素在畜产品、制品中残留，通过食物进入人体后，损害人体健康。因此，为保障人们饮用牛奶的卫生安全，牛奶中抗生素残留检测技术得到了迅速发展。目前，对牛奶中抗生素残留量的检测，通常需结合现代分离技术，如薄层色谱法（TLC）、高

4、效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、毛细管电泳法（CE）、质谱法（MS），以及这些方法的联合运用[3-12]，但高效液相色谱法是目前应用最为广泛的一种理化检测方法。本文用RP-HPLC分离-紫外检测牛奶中残留的氯霉素和四环素类4种抗生素，具有样品处理简单、快速、灵敏度较高、定量较准确等优点。2实验部分2.1仪器与试剂色谱系统：Waters510HPLC，包括：Waters510高压输液泵、柱温控制器（TCM）、Waters486紫外-可见检测器（可调波长190nm-600nm）、Rheodyne7725

5、i手动进样器、Millenium2010色谱工作站、超声波发生器、PHS-3C精密pH计等。色谱柱：SpherisorbC18柱（150mm×4.6mmID，粒径5μm）（大连江申）试剂：TC、OTC、CTC和CP标准品均购自中国药品与生物制品检定所。乙腈、甲醇均为色谱纯，其余均为分析纯。McIlvaine缓冲溶液（0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L柠檬酸）。实验用水均为二次蒸馏水。样品：市售盒装鲜牛奶（伊利牌、蒙牛牌）。2.2标准溶液的配制准确称取TC、OTC、CTC和CP对照品各约10mg，以30%

6、甲醇溶液溶解定容至10.00mL，分别配收稿日期：2009-03-15作者简介：韦文惠（1966－），女，壮族，广西河池人，教育硕士，柳州职业技术学院讲师，研究方向：化学分析。78柳州职业技术学院学报2009年9月成浓度约为1mg/mL的各标准储备溶液，于4℃冰箱保存，使用前用30%甲醇溶液适当稀释。2.3样品的处理：移取牛奶样品5.00mL，加1.00mL乙腈、4.00mLMcIlvaine缓冲溶液（pH=3.2），1.00mL100%（w/v）三氯乙酸溶液，涡旋振荡10分钟，用0.45um滤膜过滤，滤液作为上

7、柱测试品。2.4实验条件流动相：乙腈-0.2g/L氨三乙酸溶液（体积比=20:80）流速：1.0mL/min；检测波长：267nm；柱温：35℃；进样体积：20μL。所有流动相及进样的液体都经过0.45μm滤膜过滤、脱气后使用。3结果与讨论3.1实验条件选择3.1.1流动相的选择四环素类抗生素的HPLC分离的洗脱液多数用草酸与甲醇或乙腈混合配制而成[13-19]。本文也先后尝试甲醇-0.01mol/L草酸（pH2~3）、乙腈-草酸（0.01mol/L，pH2），但洗脱效果不佳。经过实验，以乙腈-氨三乙酸（pH2.

8、5-4.0）作为流动相取得了较满意的结果，色谱峰形对称、基线稳定，四种抗生素的分离效果良好。3.1.2流动相pH值对分离效果的影响流动相中氨三乙酸的浓度和pH值对四种抗生素的保留时间、分离度和检测灵敏度均有一定的影响。本文通过改变氨三乙酸溶液的浓度和pH值，研究了流动相的pH值对分离效果的影响。实验分别尝试了氨三乙酸溶液pH在2.3-4.0范围内四种抗生素的分离，结果表明