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《基质固相分散_液相色谱法测定血豆腐中激素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、分析与检测基质固相分散液相色谱法测定血豆腐中的激素周建科,宋歌,张明翠,刘瑞英(河北大学理化分析中心,河北省分析科学技术重点实验室,河北保定,071002)摘要采用基质固相分散样品前处理方法,高效液相色谱同时测定血豆腐中雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚4种激素。考察了分散剂种类、样品与分散剂质量比、洗脱剂及洗脱体积对测定结果的影响。色谱条件为:DikmaC18柱(5m,250mm46mmid),流动相为V(甲醇)V(四氢呋喃)V(水)=601030。4组分线性相关系数为09998-09999。样品检出限为0025-01g/g(S/N=3),回收
2、率830%-940%。关键词基质固相分散,液相色谱,血豆腐,激素蛋白同化激素是具有性激素活性的同化剂,它能id);流动相:V(甲醇)V(四氢呋喃)V(水)=60够促进动物生长,在特定的饲喂期间可引起蛋白质沉1030;流速:10mL/min;检测波长:雌三醇280积,从而提高饲料转化率。20世纪70年代以前,许nm,诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚241nm;柱温:室温;多国家和地区均将其用作畜禽的促生长剂。但毒理进样量:20L。采用色谱峰的保留时间定性,外标法研究表明这些药物可能诱发癌症,干扰生殖系统、神峰面积定量。[1-2]经系统、免疫系统。包括我国在内的绝
3、大多数国13标准溶液配制[3-7]家已禁止将蛋白同化激素用作动物促生长剂。准确称取雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚标若非法将这类药物用于畜禽、水产养殖,导致药物在准品各20mg,用乙醇配制成质量浓度为10mg/mL动物体内及动物性食品中的残留,将危害人类健康。标准储备液,4!冰箱存放。标准工作溶液:用乙醇逐因此,快速有效的检测动物源食品中蛋白同化激素残级稀释标准储备液。留量很有必要。血豆腐是人们日常食用的大众食品,14样品预处理有关血豆腐中蛋白同化激素的测定尚未见报道。本准确称取10g样品和20g分散剂,放入研钵,文采用基质固相分散技术处理样品,高效液相
4、色谱检轻轻研磨,将研磨好的混合物装填到可加压磨口玻璃测血豆腐中的雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚4层析柱中,柱底和柱顶均加一圆形滤纸片,用注射器种蛋白同化激素,效果良好。塞轻压使装填紧密。先用4mL二次水冲洗,去除其中的水溶性物质,再用4mL正己烷冲洗,去除其中的1实验部分脂溶性物质,最后用80mL甲醇洗脱目标化合物,收11仪器与试剂集洗脱液过045m滤膜,滤液置40!水浴,氮气流LC10AT高效液相色谱仪(日本岛津公司),吹至02mL,取浓缩液20L进样分析。SPD10A紫外检测器;7725i型手动进样阀,N20002结果与讨论双通道色谱工作站
5、(浙江大学智能信息工程研究所),UV265紫外可见分光光度计(日本岛津公司)。21色谱条件优化雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮标准品(Sigma公司);用UV265紫外分光光度计分别对4组分进行己烯雌酚标准品(AcrosOrganics公司);四氢呋喃、甲光谱扫描,由光谱图可知,雌三醇在280nm有强吸收醇、乙醇均为色谱纯;二次去离子水;血豆腐购自超峰;诺龙、甲基睾丸酮和己烯雌酚在241nm有强吸收峰;故采用波长时间程序设定检测波长为前5min,市。280nm,5min后241nm。在等度洗脱条件下,分别12色谱条件考察了甲醇水体系和甲醇四氢呋喃水体系作为流色谱
6、柱:DikmaC18柱(5m,250mm46mm动相的情况。结果显示,用甲醇水体系作流动相时,第一作者:学士,研究员。出峰时间较晚且峰形不好,用甲醇四氢呋喃水体系收稿日期:2009-06-22,改回日期:2009-09-15作为流动相,4组分分离良好。如图1所示。2009年第35卷第11期(总第263期)137食品与发酵工业FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES酮、己烯雌酚的混合标准溶液,按照14处理样品,在优化的色谱条件下,分别测定样品的本底值和加标后的含量,平行6次,回收率见表2。样品加标色谱图见图2。表2回收率(n=6)本底加入
7、量测得量回收率组分/(g∀g-1)/(g∀g-1)/(g∀g-1)/%雌三醇01008.9489.4诺龙0100.9494.01-雌三醇,2-诺龙,3-甲基睾丸酮,4-己烯雌酚甲基睾丸酮0201.7487.0图1标准品色谱图己烯雌酚0201.6683.022分散剂及用量确定考察了中性氧化铝、红色硅藻土、2种Florisil作分散剂的情况。结果表明,中性氧化铝对被分析物吸附作用强,回收率差;国产Florisil和红色硅藻土净化效果不佳,杂峰多,干扰严重;进口Florisil杂峰少干扰小,回收率较好,因此选用进
