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《haoa 环境雌激素调控_半乳糖苷酶酵母细胞建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第3期扬州大学学报(农业与生命科学版)Vol.26No.32005年9月JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)Sep.2005环境雌激素调控的B-半乳糖苷酶酵母细胞的建立1233陈春波,罗方妮,李湘鸣(1.扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;2.扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州,250009;3.扬州大学医学院,江苏扬州,225001)摘要:为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插
2、入pMP206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使LacZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明:经DNA测序发现pMP206öERE2LacZ报告质粒DNA框架正确,对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pMP206öERE2LacZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的LacZ报告基因已重组于酵母细胞,从而证明以LacZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。关键词:环境雌激素;酵母细胞;基因重组+中图分类号:Q5
3、79.13;X131文献标识码:A文章编号:16714652(2005)03002104YeastcellbioassaydevelopmentbasedonenvironmentalestrogenregulatingB-galacosidase1233CHENChun-bo,LUOFang-ni,LIXiang-ming(1.VetColl,YangzhouUniv,Yangzhou,225009,China;2.AnimSciandTechColl,YangzhouUniv,Yangzhou,22
4、5009,China;3.MedColl,YangzhouUniv,Yangzhou,225001,China)ABSTRACT:Toestablishthebioassaysystemofenvironmentalestrogen,thereporterplasmidofpMP206öERE2LacZwasconstructedbyinsertingtwoconsensusERE2sequencesintotheupstreamofpMP206.Thereportervectorwastransfor
5、medintothehumanestrogenreceptorrecombinantyeastcell.Inthisway,thereportergene,LacZ,wasunderregulationofestrogen.Thisyeastcellcouldbeusedtoscreenenvironmentalestrogen.ResultsshowedthatDNAsequencesrevealedthereportervectorofpMP206öERE2LacZwiththecorrectDNA
6、fragment.TheDNAfragmentsofestrogengeneandthepMP206öERE2LacZreporterplasmidwerefoundwithPCRmethodinthetransformant.ThisexhibitedthatestrogenreceptorandLacZreportergenehadbeenrecombinedintotheyeastcell.TheyeastcellforenvironmentalestrogenbioassaybasedonLac
7、Zreportergenewassuccessfullyrecombined.KEYWORDS:environmentalestrogen;yeastcell;generecombination.雌激素效应元件(ERE)位于雌激素可调控基因的上游。当雌激素受体与雌激素结合后,会发生某种变构效应而被激活。被激活的雌激素受体的DNA结合区(DBD)特异地识别ERE,从而调控相关靶基[1]因的转录与表达。具有雌激素效应的环境化学污染物(环境雌激素),主要通过这种方式干扰机体内分泌系统。在用基因重组酵母细胞测评
8、环境雌激素的过程中,一是要建立雌激素受体(ER)cDNA酵母表达质粒,另一重要的环节便是将ERE与报告基因LacZ(B2半乳糖苷酶基因)相串联,构建成酵母报告载体,将报告基因置于环境雌激素的调控之下,通过测定报告基因的表达量而实现对环境雌激素的污染程度的评价。收稿日期:20050105基金项目:教育部留学回国人员科研启动基金(PK0407149);江苏省高校自然科学基金资助项目(03KJB610168);江苏省卫生厅医学科技发展基金资助项目
