雌激素调控子宫内膜癌ishikawa细胞中lrp16基因表达及其意义

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1、雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义孟元光，韩为东，黄柯，伍志强，赵亚力，母义明，宋磊【关键词】LRP16基因；雌激素；IshikaanendometrialcancerIshikaanendometrialcancerIshikaolecularmechanism.METHODS:TheLRP16mRNAlevelinIshiinedbyNorthernblotanalysis.TherelativeluciferaseactivityeasuredusingDuallucife

2、rasereporterassaysystem.TheeffectofLRP16overexpressiononIshiinedbytheTrypanBlueexclusionmethod.TheinvasivenessofIshikainedbyMP2，MMP9以及CD44蛋白水平的变化.结论：我结果表明E2通过激活ERα上调子宫内膜癌IshikaRNA水平，LRP16表达水平依赖于雌激素.LRP16基因表达上调没有促进子宫内膜癌细胞的增殖，但可能通过抑制E钙粘合素表达水平增加了细胞的侵袭能力.　　【关键词】L

3、RP16基因；雌激素；Ishikaa公司；DMEM培养液、胎牛血清（FCS）购于美国Hyclone公司；兔抗MMP2，MMP9，CD44，鼠抗Ecadherin以及βactin抗体购于美国SataCruz公司；L15以及无酚红DMEM培养基购于协和医科大学基础所细胞中心；去除E2血清由我室自行制备；〔32P〕dCTP购自北京亚辉公司；探针标记试剂盒购自美国Promega公司；ERα与LRP16真核表达载体由我室保存.ICI182780由军科院叶棋浓教授提供；Superfect转染试剂购自Qiagen公司；LRP1

4、6基因启动子（-676至-24bp）驱动的荧光素酶报道子pGL3S5参见文献〔3〕.　　1.2细胞培养Ishika培养皿培养Ishikag/L）筛选培养14d，200mg/L维持培养进行细胞学与分子学实验.IshikaL100g/LFCS的培养基和Fibronectin(16μg/室).继续培养24h后，甲醇固定下小室细胞，HE染色，光学显微镜下(×200)随机选取15个视野进行细胞记数，算出每个视野的平均值.上述实验重复3次.　　1.6NorthernblotTriZol提取总RNA，每个样品取20μg上样于1

5、2g/L的甲醛变性凝胶，100V电泳1.5h，毛细管法将核酸转移至尼龙膜，80℃烤膜2h.杂交后的尼龙膜用4×SSC/5g/LSDS漂洗30min，置-80℃放射自显影.具体过程参见文献〔5〕.　　1.7MP2（1∶400），MMP9（1∶400），CD44（1∶400），Ecadherin（1∶200）及βactin（1∶500）孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗杂交，放射自显影.　　2结果　　2.1LRP16基因在IshikaRNA表达水平的上调；为观察抑制ERα活性对IshikaRNA水平显著下调（图1B）

6、，该结果表明E2刺激IshikaRNA表达量，结果如图1C示，外源性转染ERα明显提高了IshikaRNA水平的差异，结果显示LRP16过表达明显下调了IshikaRNA与蛋白水平（略）　　3讨论　　子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，雌激素对正常子宫内膜的过度刺激以及雌激素受体的过度表达是导致子宫内癌发生与进展的主要因素，越来越多的研究资料证实雌激素通过其下游靶基因导致子宫内膜癌的发生与进展〔6〕，故识别新的雌激素靶基因并对其生物学功能进行研究对从分子水平研究子宫内膜癌有重要的科学意义与潜在的诊断治疗价值.　　

7、LRP16是本研究组识别的一个雌激素反应性基因，既往研究证实雌激素通过其受体α（ERα）上调LRP16基因转录，该基因过表达促进内源性ERα阳性的乳腺癌MCF7细胞增殖，分子机制涉及了G1/S期周期转换蛋白cyclinE与cyclinD1的表达上调〔1-2〕.但LRP16在内源性ERα阳性子宫内膜癌细胞中的研究目前尚不清楚.本项目以子宫内膜癌IshikaRNAby17βestradiolthroughactivationofestrogenreceptorα(ERα),butnotestrogenreceptor

8、β(ERβ),andpromoteshumanbreastcancerMCF7cellproliferation:Apreliminaryreport〔J〕.EndocRelatCancer,2003,10(3):215-222.　　〔2〕韩为东，李琦，赵亚力,等.小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF7乳腺癌细胞增殖〔J〕.中国生物化学与分子生物学报,2005,