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1、子宫内膜癌中Syk基因表达及其甲基化研究【摘要】目的探讨Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达及其启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法采用RT�PCR方法检测52例子宫内膜癌及癌周组织、30例子宫内膜不典型增生、28例复杂型�生、30例单纯型增生和40例正常内膜组织中SykmRNA的表达情况，同时采用MSP方法检测其基因启动子甲基化情况。结果在子宫内膜癌组、癌周组织、不典型增生组、复杂和单纯型增生及正常子宫内膜组中Syk基因表达依次增高，Syk基因甲基化程度依次降低，差异有统计学意义(P0.05)；子宫内膜癌中Syk基因的阳性表达及甲基化程度与癌
2、症的临床分期(χ�2=4.65，P0.05;χ�2=0.94，P>0.05)。Syk基因启动子甲基化与Syk基因表达缺失明显相关(P0.05;χ�2=0.94，P>0.05).PromotermethylationofSykgenewaspositivelycorrelatedlossexpressionofSkygene.ConclusionPromotermethylationofSykgenemaybeonereasonforinactivationofit,whichmaycausetheoccurrenceanddevelopmentofendom
3、etrialcancer.�【Keywords】10Endometrialcancer;Sykgene;Promoter;Methylation��作者单位：277100山东省枣庄市妇幼保健医院子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，发病率呈明显增高和低龄化趋势1，2］，发病原因及机制尚未完全阐明。近年来，脾酪氨酸激酶基因(spleentyrosinekinase,Syk)引起了国内外学者的重视，认为Syk基因是一种新发现的候选抑癌基因，其失活可能与某些肿瘤的发生有关，其启动子甲基化可能是基因失表达的重要原因，但目前在子宫内膜癌中尚无相关研究。本实验拟
4、通过RT�PCR和甲基化特异性PCR检测Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达情况及其甲基化状态，探讨Syk基因启动子甲基化在子宫内膜增生及其恶变过程中的作用和意义。�1资料与方法�1.1一般资料选取我院2005年1月至2010年12月手术治疗的子宫内膜癌患者52例,年龄38～72岁，中位年龄52岁。按照FIGO(2000年)子宫内膜癌分期：Ⅰ期26例、Ⅱ期15例、Ⅲ期8例、Ⅳ期3例；组织学分级：G��1�18例、G��2�级24例、G�103级10例。术后病理证实肌层浸润深度＞1/2者29例、≤1/2者23例；有淋巴结转移8例，无淋巴结转移44例。同期收
5、集距子宫内膜癌肿瘤边缘1cm的癌周组织52例、子宫内膜单纯性增生过长30例、子宫内膜复杂性增生过长28例、子宫内膜不典型增生30例、因子宫脱垂或输卵管卵巢囊肿行子宫切除的正常子宫内膜40例作为对照组。取得标本迅速置液氮冷冻，�80℃冰箱保存备用。所有标本均经病理证实，临床资料完整，术前均未经放疗、化疗及激素治疗。�1.2主要试剂RNA抽提及RT�PCR试剂盒均购自大连宝生物公司、DNA提取试剂盒购自上海华舜试剂公司、甲基化修饰及纯化试剂盒为美国EPIGENTEK公司产品。�1.3RNA提取取100mg的标本应用RNA提取试剂盒,按说明书要求提取RNA后于紫外
6、分光光度计测OD��260�/OD��280�定量并检测其纯度，�70℃冰箱保存待用。�1.4RT�PCR反应取1μg总RNA逆转录为cDNA后，取2.0μlcDNA为模板于20μl体系进行PCR10扩增，引物由上海生物工程公司合成，Syk引物序列Primer1：5��TTCTCCAGCAAAAGCGATGTCT�3�，Primer2：5��TTTCCACATCGTATGTCCAGCA�3�，产物长度199bp,反应参数：94℃5min,94℃30s,57℃30s,72℃30s,30个循环,72℃10min。内参照GAPDH引物Primer1：5��TCAT
7、GGGTGTGAACCATGAGAA�3�，Primer2：5��GGCATGGACTGTGGTCATGAG�3�，扩增片断115bp，反应参数：95℃15min,95℃1min,62℃1min,72℃1min,30个循环,72℃10min。3μlPCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像系统下经Biocaptmw软件分析进行半定量分析。�1.5DNA的准备和MSP取50～100mg标本按照DNA提取试剂盒的说明书提取DNA，测定OD值确定其浓度和纯度。DNA甲基化修饰严格按照试剂盒上的说明。修饰的DNA应用PCR试剂盒进行巢式双重PCR,首轮PCR的引物
8、为:5��GATTAAGATATATTTTAGGGA
