半滑舌鳎cynoglossus semilaevis细胞培养及细胞系建立的研究

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1、fff蛐llIIllflIlillilllllll独创声明Y2159726本人声明所里交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知．除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含末获得!挂；堑坦直基位霞噩娃型直隧曲，奎摧丑窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贞献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：粹：jk签字H期：曲11年‘月*只学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以～F事项：l、学校有权保留并向国家有关部门或

2、机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阏。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。可以采J{i影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学u中国学术期刊(光盘版)电子杂志社w用于出版和编^洲KJ《中周知识盗源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文垒文数掘库》。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：爱母圾导师签字签字日期：山旺年‘月g同签字日期伽硌，半滑舌鳎细胞培养及细胞系建立学位论文完成日期．指导教师签字答辩委员会成员签字：瑟褫摘要鱼类细胞培养的研究始于20I!

3、：}纪60年代。1962年，Wol

4、r和Quimby建立了世界上第一个鱼类细胞系，即虹鳟鱼生殖腺细胞系RTG2。此后，鱼类细胞系的建立及其相关研究进展迅速。迄今为止．不仅建立了280余株鱼类细胞系，而且鱼类培养细胞已成为一种重要的研究手段在病毒学、免疫学、鱼类资源保护与遗传育种、肿瘤学、环境毒理学、鱼类生理学、内分泌学等方面的理论及应用研究中发挥作用。因此，对鱼类细胞培养及其细胞系建立进行研究具有深远意义。半滑舌鳎经济价值高，自然资源量少，是我国新开发的重要海水养殖鱼类。然i面，近年来．随着阿益IIll的环境污染、养殖规模的扩大以及集约化程度的提高．半滑舌鳎病害导致的死亡事件时有发生．给半滑舌鳎养萌业带来了巨大的经济损失。半

5、滑舌鳎致病病原特性和免疫抗病基因功能的研究是从根本上解决病害的方法；同时．半滑舌鳎雌、雄个体差异非常大，并H属Zw型性别决定体系难开展性别分化研究的理想材料。细胞系作为种体外培养系统，因其成本低、试验重复性好、条件可精确控制的优点而成为该鱼种相关研究的重要工具。本论文选取雌性半滑舌鳎(CyDog]ossussemilaevJs)头肾、心脏、卵巢组{!!；{开展了细胞培养及细胞系建立研究。半滑舌鳎头肾细胞系(TSHKC)、心脏细胞系(TSHC)和卵巢细胞系(TSOC)的培养基为添加20％FBS，j0训2-Me．t00u／m1青裤素，lOOug／m链霉素，lmM丙酮酸钠，10ng／mlbFGF

6、的MEM完全培养基，=三种细胞的形态均为成纤维样。TSIII

7、胞内观察到病毒颗粒。将GFP和GRP报告基因通过脂质体介导的方法转入TSHKC细胞中并成功获得了表达；将GFP报告基因通过脂质体介导的方法分别转入Ts眦和Ts倪细胞中也成功获得了表达。文中对雌性半滑舌鳎脾脏、肝脏组织的细胞离体培养进行了初步研究，描述了脾脏组织中淋巴细胞、成纤维样细胞、上皮样细胞的生长特性，对肝脏细胞的离体培养进行了初步探索，为脾脏免疫细胞功能研究奠定基础的同时，为今后脾脏、肝脏细胞系的建立提供了依据。其次，通过脂质体介导的方法将GRP和GFP报告基因分别在脾脏和肝脏的细胞中得到表达，为利用脾脏、肝脏细胞进行外源基因转染及功能研究提供了依据。综上所述，文中通过不同的鱼类细胞

8、原代培养方法，建立了雌性半滑舌鳎头肾细胞系、心脏细胞系和卵巢细胞系，并从病毒感染性和外源基因转染性两个方面对细胞系的应用性进行研究，为今后在细胞系基础七开展的相关研究奠定了基础。同时，针对雌性半滑舌鳎脾脏、肝脏细胞离体培养及其细胞应用方面的初步研究为脾脏、肝脏细胞在井源基因转染及功能研究中的应用及脾脏、肝脏细胞系的建立提供了依据。关键词：半滑舌鳎．头肾细胞系，心脏细胞系，卵巢细胞系，细胞离体培养AbstractThere