半滑舌鳎(cynoglossus semilaevis）r-spondin1和r-spondin3基因的克隆与表达分析

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1、變寸拍沾考１ＣＩ心少）ＮＩＮＶＹ（）ｌＩＮＡ心（（１ＡＩＫＲＳＩＴ硕±学位论文ＭＡＳＴＥ民Ｄ。化民ＴＡＴＩＯＮＩ论文睡目：和基因的克蔭与表达分析Ｃｈａｒａｃ化ｒｉｓｔｉｃａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆ－－ｏｎｄｉｎＳＧｅｎｉｎＴｏｎｕｅＲｓｐｉｎｌａｎｄＲｓｐｏｎｄｅｓｇ英文函目：Ｓｏｌｅ｛Ｃｎｏｇｌｏｓｓｕｓｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）ｙ：刘田田作者巧导教师：齐洁教授学位类别：全日制学术学位专业名巧：海洋生物学海洋生物遗传学研巧方向：ｒ

2、Ｐ苗谨ｌｉＵｋ论文献给我敬爱的导师和掌爱的父母－刘田田；－ＣｙｎｏｇＩｏｓｓｕｓｓｅｍｉＩａｅｖｉｓＲｓｐｏｎｄｉｎ１羊清看轉）碱（－＞？ＳＣ７Ｃ７Ａ７ｉｙ／＞？＊？基因的克隆与表达分析ｙ．２０弓５．学位论文答辩日期：）巧指导教师签字：毛：答辩委员会成员签字独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。据我所知，除了文中特别加Ｌ：！标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所

3、做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。２＾学位论文作者签名；；：０５年５月２１日期日＾＾０｜０签字？学位论文版权使用授枚书レ本学位论文作者完全了解学校有关保留，ッ下、使用学位论文的规定并同意事项：１、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２，可Ｗ、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索＂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文

4、收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在巧密后适用本授权书）：学位论文作者签名：西＠导师签字签字日期；么日签字日期：年月日）巧年５月呼方，曼ｒ＜＇羊清肴爲ｎｏｌｏｓｓｕ－ｓｏｎｄｎ｛Ｃｙｇｓｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）ＲｐｉＩ賊基因的克隆与表达分析摘要＇半滑舌锡ｗｗ／ｆｌｅｖ／ｓ）是我国极其重要的海洋养殖经济鱼类，雌雄个体差异较大－－。Ｊｉｓｐｏｎｄｉｎ（Ｒｓｐｏ）蛋白家族并有４位成员，Ｒｓｐ〇ｊ４，为分泌性蛋白。化＞０蛋白家族成员含有相似度很髙的保守结构域：２个富含半脫氨／ｆｕｒ－－酸的ｉｎｌｉｋｅ结构功能域（ｆ

5、ｉｊｒｉｎｌｉｋｅｃｙｓｔｅｉｎｅｒｉｃｈｄｏｍａｉｎ，ＦＵ）和１个血小板反－应蛋白结构域（ｔｈｒｏｍｂｏｓｏｎｄｉｎｔｅ。ｐｙｐ】ｄｏｍａｉｎ，ＴＳＰ１）己知所有的成员蛋白均能与Ｗｎｔ信号通路相互作用，在脊椎动物发育过程中发挥着不同的功能。化ｐｏ７一基因作为，在性别决定个卵巢决定和分化的最佳候选基因、皮肤分化和恶性肿瘤等方面都具有重要的功能。化基因能调控造血干细胞命运、促进血管生成、调控晴乳动物胎盘发育等等。本实验主要是通过同源克隆技术和ＲＡＣＥＰＣＲ技术（ＲａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓＰＣＲ）分离出

6、半巧舌場化？〇／基因和化ｗｉ／；基因的ｃＤＮＡ全长，利用原位杂交和巧光定里ＰＣＲ对其基因表达巧行了研究，结合所得到的结果通过生物信息学分析，对这２个基因的功能进行了预测。具体总结如下：（１）半滑舌绍化基因的克隆和表达分析利用同源比对得到的简并引物和ＲＡＣＥ引物，克隆分离出半滑舌錫化基因０ＲＦ全长为８３４ｂｐ，编码２７７个巧基酸，分子童大小约为３０．５２ｋＤａ。蛋白－－、、－ＴＳＰＩ结构域１３７５４质结构预测其含有ＦＵ１、ＦＵ２，分别位于３１８６９３和１２１６处，蛋白比对结果表明半滑舌综化ｐｏＪ基因気基酸序列与其他物种尤其是海洋鱼类的化基因务

7、基酸序列相似度比较商。，系统进化树的分析也验证了上述结果－，４０％进化树明湿的分为两大枝：鱼类该基因分化较大物种间相似度只有６０％，而四足类动物中达到了９９％Ｗ上。分析预測启动子区的转录因子，发现巧在性别－相关转录因子Ｓｏｘ５ＳＲＹ的结含位点，这对研巧该基因功能提供了帮助。实时，－巧光定》ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）结果表明半巧舌巧化基因在胚胎时期的表达主ｑ要是从克氏泡时期之后开始明显升巧。鉴于其在性别分化中的作用．我们比较了，该基因在巧雄组织中的差异表达，发