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《植物乙醇酸氧化酶分离纯化方法的改进》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、植物学通报2006,23(6):703~707ChineseBulletinofBotany.技术与方法.植物乙醇酸氧化酶分离纯化方法的改进*郭晋雅,董宇亮,杨净,徐杰,尹汗萍,曾秋莲华南师范大学生命科学学院,广东省植物发育生物工程重点实验室,广州510631-1摘要通过缩短DEAE-Cellulose柱长度,加快流速并采用pH8.8的80mmol.LTris-HCl为洗脱液,可在9-1小时内快速地从菠菜、菜心和豆角绿叶中纯化得到乙醇酸氧化酶。该酶具高活性(54.6～197.0U.mg)及高等电点(pI>10.0)。产率为4.1%～71.5%,纯化倍数为21.6～122.6
2、8。经SDS-PAGE检测均有40kD带,表明3种植物乙醇酸氧化酶的亚基大小无区别。关键词乙醇酸氧化酶,纯化,菠菜,菜心,豆角ImprovementofthePurificationMethodofPlantGlycolateOxidase*JinyaGuo,YuliangDong,JingYang,JieXu,HanpingYin,QiulianZengCollegeofLifeSciences,SouthChinaNormalUniversity,GuangdongKeyLabofBiotechnologyforPlantDevelopment,Guangzhou510
3、631,ChinaAbstractByreducingthelengthofdiethylaminoethanol-celluloseandincreasingthepHinelutionsolution,wedevelopedanimprovedmethodforpurifyingglycolateoxidasewithhighisoelectricvalue(pI>10.0)fromgreenleavesofSpinaciaoleracea,Brassicaparachinensis,andPhaseolusvulgaris.Purifiedglycolateoxida
4、se-1showedhighspecificactivity(54.6-197.0U.mg)andhighpI(>10.0).Weachieved21.6-122.68-foldpurifi-cationand4.1%-71.5%yieldfromcrudesolutionduringthispurificationprocedure.SDS-PAGEoftheglycolateoxidasesrevealeda40-kDband,whichindicatesthatthesubunitmolecularweightofglycolateoxidasesinthe3diff
5、erentplantswasidentical.Keywordsglycolateoxidase,purification,Spinaciaoleracea,Brassicaparachinensis,Phaseolusvulgaris乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase,GO)是植(StenbergandLindqvist,1996),南瓜(Nishimura物光呼吸的关键酶。抑制其活性可提高C3植etal.,1983)、小麦(Halletal.,1985)和黄瓜物的产量(Zelitch,1975)。但目前人们并未找到(Behrendsetal.,1982)GO
6、均为43kD,豌豆GO有效抑制GO活性的方法,GO的蛋白性质仍有为48kD(KerrandGroves,1975),藻(S.pacificum)许多疑问。目前普遍认为GO只含有1种亚基,的GO为49kD(Iwamotoetal.,1996)。用免疫是因为从多种植物中纯化了GO,经SDS-PAGE印迹法,则证实豌豆GO的亚基大小为45kD检测呈单带。但亚基分子量差异较大:如菠菜(Stefaniaetal.,1999)。这种差异是因为不同植GO为38kD(FrigerioandHarbury,1958)或40kD物材料,或因为纯化中GO发生了降解,还是因收稿日期:2006-03
7、-13;接受日期:2006-07-13基金项目:广东省自然科学基金(No.021105)*Authorforcorrespondence.E-mail:xujie@scnu.edu.cn70423(6)为SDS-PAGE方法本身的误差所造成仍不清加100mL的1mmol.L-1FMN。在3.5cm×8楚。另外,用粗提物和纯化GO蛋白为材料,均cm的DEAE-Cellulose上层析,用80mmol.L-1发现GO有多种pI,但结果却有不同:用粗提物Tris-HCl(pH8.8)为洗脱液,流速为2mL.min-1。为
