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1、第1章综合实验和设计型实验综合实验A绿原酸的分离纯化及样品中绿原酸含量分析实验21绿原酸的分离纯化一、实验目的与要求1.掌握绿原酸的结构特征；2.掌握绿原酸的提取分离方法。二、基本原理绿原酸是由咖啡酸（caffeicacid）与奎尼酸（鸡纳酸,quinicacid）（1-轻基六氢没食子酸）组成的缩酚酸，界名咖啡蘇酸，系统名称为1,3,4,5-四疑基环己烷竣酸-3-（3,4-二疑基肉桂酸酯），化学名为3-0-咖啡酰奎尼酸（3-0-caffeoylquinicacid,主要为反式），其分子式为CmHiG,分子量354.3o绿原酸是植物在有氧呼吸过程屮经莽草酸途径（shikimicaci
2、dpathway）所产生的一类苯内素类化合物，存在于许多中药材中，从高等双子叶植物到蕨类植物中均有分布，但含虽:较高的植物并不多。绿原酸主要存在于杜仲科、忍冬科忍冬属5ice谕、菊科蒿属^Artemisia｝及茜草科咖啡属（Coffe^等植物中，其屮含量较高的植物包插杜仲、金银花、继花、梔子、茵陈、蒲公英、咖啡等。植物中绿原酸的生物合成包括了一系列的酶促反应。绿原酸及其类似物的牛物合成途径相似，因此，在植物体内存在的绿原酸有时为混合物。异绿原酸C（3,5-二咖啡酰奎尼酸）（4-咖啡酰奎尼酸）隐绿原酸（Band510）异绿原酸A（4,5-二咖啡酰奎尼酸）咖啡酸常和绿原酸共存于植物中，
3、可能是绿原酸的水解产物或生物合成的前体。根据咖啡酰基在奎尼酸上的结合部位和数目不同，所组成的绿原酸界构体共有10利A但到冃前为止，从植物中发现的绿原酸异构体冇如下几种（图）。此外，冇人也将阿魏酰奎尼酸视为绿原酸的界构体，如从绿咖啡豆中发现的3-阿魏酰奎尼酸，4-阿魏酰奎尼酸和5-阿魏酰奎尼酸。绿原酸为淡黄色针状结晶,Mp206-208°C,[a严厂35.2°（02.8%,水）。水溶解度为4%（25°C）,热水溶解度更大。碱性溶液中呈橙色，易溶于乙醇、丙酮，极微溶于乙酸乙酯。与稀酸共热分解町产生咖啡酸。咖啡酸，黄色结晶，从稀水溶液中得1水合物,分解点223-225°C（在194°C软
4、化），微溶于冷水，易溶于热水及冷乙醇。分了式CgHQ,分了量180.15o绿原酸异绿原酸B（3,4-二咖啡酰奎尼Oil3-阿魏酰奎尼酸4-阿魏酰奎尼酸5-阿魏酰奎尼酸绿原酸是金银花中的抗菌有效成分，芒麻中的止血、升白有效成分，以及茵陈屮的利胆成分。金银花为忍冬科植物忍冬ionicerajiaponicaThumb的T•燥花蕾，主产于河南、山东等地。金银花具有清热解毒凉散风热的功效主治风热感冒湿病发热等症。其屮的主要化学成分为绿原酸和界绿原酸。木犀草索-7-葡萄糖昔、肌醇、獐牙菜甘等。花蕾中还有挥发性成分如香树烯、芳樟醇、香叶醇、辛醛等二十余种成分。金银花叶中含有忍冬黄素、忍冬昔帝木
5、鳖背及糅质等。另外，金银花中过去曾被称为界绿原酸的成分实际上是山三种咖啡酸的衍生物：4,5-二咖啡酰鸡纳酸，3,4-二咖啡酰鸡纳酸，3,5-二咖啡酰鸡钠酸组成的混合物，它们也是抗菌有效成分。本实验以金银花为原料来提取绿原酸。三、仪器与试剂1.仪器：离心管，离心机，具塞刻度试管，薄层层析板，紫外-可见分光光度计，超声仪2.材料与试剂：卅i物样品（已辭细），80%乙醇，高氯酸，硅胶G,硼酸，木糖，果糖，葡萄糖，蔗糖，苯胺，磷酸，丙酮，硫酸，3,5-二硝基水杨酸，恿:酮试剂，，氯仿：冰醋酸:水（18：21：3）,苯胺-二苯胺磷酸丙酮溶液四、实验内容与步骤L绿原酸的提取方法一称取金银花蕾的
6、粉末20g,用少量石汕酬脱脂处理后，加入75%乙醇100mL加热冋流提取0.5h,过滤，残渣再提収一次。提取液合并后浓缩至干，所得浸膏重新溶解于100mL热水，直分液漏斗屮，冷后用少量石汕瞇（40mL）振摇洗涤2次除杂。然后，加醋酸铅至不再生成沉淀为止，滤取沉淀，水洗，再用10%硫酸脱铅，过滤，减压蒸馆至干。所得提取物屮主要含绿原酸。方法二称取金银花蕾的粉末20g,100mL水回流提取2次，提取液减压浓缩至40mL左右，在搅拌下缓缓加入适最20%石灰乳悬浊液，调pH至9左右，静置，离心分取沉淀物。所得沉淀物悬浮于50mL水，用少量石油瞇（40mL）振摇洗涤2次，除杂。然后，加醋酸铅
7、至不再生成沉淀为止，滤取沉淀，水洗抽干。加入2倍量乙醇于沉淀中。在搅拌下，滴加50%硫酸，调节溶液pH至3左右，充分搅拌0.5h后，离心除去固体物。滤液以浓碱调至pH6,冋收乙醉，减压抽干，得粗提物。2绿原酸的纯化取粗提物溶于2-3倍量水屮，用浓盐酸调至pH2,以乙酸乙酯提取3次，提取液用适量活性炭冋流脱色，过滤，滤液浓缩后分批加入适量氯仿，析出沉淀，滤取析出的淡黄色固体物，减圧干燥得精品，总收率约0.5%。3咖啡酸制备取含绿原酸的水溶液，加50%氢氧化钾调至碱性，煮
