植物绿叶乙醇酸氧化酶（GO）的提取、抗体制备和免疫检测

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1、植物绿叶乙醇酸氧化酶(GO)的提取、抗体制备和免疫检测生命科学学院XX学XXX2012XXXXX摘要：本次实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料，利用分级沉淀、分子筛、离子交换树脂等色谱技术提取，分离纯化乙醇酸氧化酶(GO)。并利用考马斯亮蓝染色法测定提取的GO的含量，对提取的GO样品进行SDS-PAGE凝胶电泳结果出现了一条40KD的蛋白带。挖取40KD蛋白凝胶条带作为抗原，通过皮下注射大鼠制备抗体。最后，通过WesternBlot分析抗体的纯度。关键词：乙醇酸氧化酶分离和纯化制备抗体WesternBlot1—刖吞乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15简

2、称GO)是光呼吸的关键酶，理论上抑制GO活性能显著降低C3植物的光呼吸，从而提高其净光合效率。在GO被发现之后的几十年间，人们对GO的酶学和基因表达特性等进行了深入的研究。在目前屮国乃至世界人口不断增加和可耕种土地FI益减少的情况下，GO的研究具右重要的理论意义和实际应用价值。GO在自然界广泛分布，在被子植物，低等苔醉，蕨类，藻类植物一级动物肝脏屮均有报道。本实验通过10%醋酸沉淀、15%〜35%硫酸镀分步沉淀、上SephadexG-50柱、idDEAE-cellulose获得具冇活性的渡菜GO,经SDS-PAGE,出现了一条具有活性40KD大

3、小的蛋白带。具休实验方法和结果如下：1实验材料波菜绿叶均购口由场,2000ml的100mmol/L磷酸二氢钠■磷酸氢二钠缓冲液(PBS,pH&0)、1000ml10%HAC(V/V)(现配)、2X1000ml400mmol/LTris-HCl(pH&3)、6m1的lmmol/LFMN、15mllOOmmol/L盐酸苯月井、15ml1OOmmol/L乙醇酸、考马斯亮蓝试剂、不同浓度的标准蛋白溶液(牛血清蛋白)、SDS-PAGE电泳有关的试剂、SephadexG-25层析柱、NC膜、滤纸。2实验方法2.1制定标准曲线配制不同浓度的标准蛋白溶液，浓度

4、(mg/ml)分别是:0、1、0.5、0.25、0.125>0.062、0.031；加入3ml的考马斯亮蓝试剂，摇匀，2分钟内以0号管为对照，在595nm处比色，根据所测得结果，以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。在标准曲线的直线范围内，根据所测定的植物绿叶乙醇酸氧化酶(GO)的提取、抗体制备和免疫检测生命科学学院XX学XXX2012XXXXX摘要：本次实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料，利用分级沉淀、分子筛、离子交换树脂等色谱技术提取，分离纯化乙醇酸氧化酶(GO)。并利用考马斯亮蓝染色法测定提取的GO的含量，对提

5、取的GO样品进行SDS-PAGE凝胶电泳结果出现了一条40KD的蛋白带。挖取40KD蛋白凝胶条带作为抗原，通过皮下注射大鼠制备抗体。最后，通过WesternBlot分析抗体的纯度。关键词：乙醇酸氧化酶分离和纯化制备抗体WesternBlot1—刖吞乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15简称GO)是光呼吸的关键酶，理论上抑制GO活性能显著降低C3植物的光呼吸，从而提高其净光合效率。在GO被发现之后的几十年间，人们对GO的酶学和基因表达特性等进行了深入的研究。在目前屮国乃至世界人口不断增加和可耕种土地FI益减少的情况下，GO的研究具右重要的理论意义和实

6、际应用价值。GO在自然界广泛分布，在被子植物，低等苔醉，蕨类，藻类植物一级动物肝脏屮均有报道。本实验通过10%醋酸沉淀、15%〜35%硫酸镀分步沉淀、上SephadexG-50柱、idDEAE-cellulose获得具冇活性的渡菜GO,经SDS-PAGE,出现了一条具有活性40KD大小的蛋白带。具休实验方法和结果如下：1实验材料波菜绿叶均购口由场,2000ml的100mmol/L磷酸二氢钠■磷酸氢二钠缓冲液(PBS,pH&0)、1000ml10%HAC(V/V)(现配)、2X1000ml400mmol/LTris-HCl(pH&3)、6m1的l

7、mmol/LFMN、15mllOOmmol/L盐酸苯月井、15ml1OOmmol/L乙醇酸、考马斯亮蓝试剂、不同浓度的标准蛋白溶液(牛血清蛋白)、SDS-PAGE电泳有关的试剂、SephadexG-25层析柱、NC膜、滤纸。2实验方法2.1制定标准曲线配制不同浓度的标准蛋白溶液，浓度(mg/ml)分别是:0、1、0.5、0.25、0.125>0.062、0.031；加入3ml的考马斯亮蓝试剂，摇匀，2分钟内以0号管为对照，在595nm处比色，根据所测得结果，以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。在标准曲线的直线范

8、围内，根据所测定的A595i】m值，在标准曲线上查出英相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/ml)。2.2乙醇酸氧化酶(GO)的提