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《重组人睫状神经营养因子衍生物的构建、表达和活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、&"微生物学免疫学进展!""#年第%*卷第*期))+9:GKBVKL9:IK:EQFFDB:E.:P=!""#，X:E=%*.:=*重组人睫状神经营养因子衍生物的构建、表达和活性分析张振龙，徐静，郭秀梅，孙成金，王涛，郭鹏（北京生物制品研究所，北京)&"""!*）摘)要：采用+,-定点突变技术对睫状神经营养因子（,./0）基因进行改造，获得了,./0衍生物（,./0$1）基因序列分析证明其核苷酸序列符合设计要求，并在大肠杆菌中获得高效表达，,./0$1表达量超过*"2，复性后，经3$456789:;5<+纯化，其纯度超过(’2，体内法测定发现能明显降低实验小鼠的体重。表明
2、,./0$1在体内具有良好的生物学活性，为下游开发奠定了基础。关键词：睫状神经营养因子；点突变；基因表达中图分类号：-%(!=&&)))文献标示码：>)))文章编号：&""’$’#?%（!""#）"*$""&"$"*!"#$%&’(%)"#，*+,&*$$)"#-#.-(%)/)%0-#-10$)$"2&*("34)#-#%5’3-#()1)-&0#*’&"%&",5)(2-(%"（&!678）.*&)/-%)/*!"#$%!&’()*+(,，-./0(,，%.1-02)3’0，’45*6（$540+(5*75880(’9:’;23<(=40424’，>’0?0(,&""
3、"!*，@&0(5）94$%&-(%：@8;5A:BC75B8CD98E7DF8B,./0G5B5，C75FDC8C5A7,./0G5B5H8;G5B598C5AIJ;KC5$;65LKMKLFDC8G5B5;K;=/75G5B5H8;KB;59C5AKBC:A68+*08BAL:BMK9F5AIJ1.>;5ND5BLKBG=/757KG75O695;;K:B:M,./0$178;I55B8L7K5P5A=/755O695;;K:BE5P5E:M95L:FIKB8BC69:C5KB958L75AC:F:95C78B*"2=/756D9KCJ:M,./0$1H8;8I:DC
4、(’28MC59A5B8CD$9KBG8BA6D9KMJKBGIJ3$456789:;5<+L79:F8C:G9867J=/75IK:E:GKL8E8LCKPKCJ:M,./0$1H8;F58;D95AIJF:D;5KBPKP:C5;C=/7595;DEC;;7:H5AC78CC7K;FDC8BC69:C5KBL:DEA:IPK:D;EJ95ADL5I:AJH5KG7C:MC5;C5AF:D;5=QCE8KA8M:DBA8CK:BKBA5P5E:6F5BC:M8B5HCJ65:M7KG75MMKLK5BCI:AJH5KG7C95ADLKBGA9DG=:*0;"&.$：,K
5、EK89JB5D9:C9:67KLM8LC:9（,./0）；4KC5$;65LKMKLFDC8G5B5;K;；R5B55O695;;K:B))睫状神经营养因子（,KEK89JB5D9:C9:67KLM8LC:9，因进行改造，获得了,./0衍生物（,./0$1）基因，,./0）最初是自鸡胚眼球脉络膜、睫状体和虹膜中并在大肠杆菌中获得高效表达。发现，因能促进体外培养的鸡胚副交感睫状节神经材料和方法〔&，!〕原存活而命名。,./0广泛分布于神经系统，具有广泛的生物学效应，促进前体神经元生长、分化和<=材料成熟，它能够促进运动神经元细胞群存活，对中枢神含,./0L1.>的重组质粒
6、6/?T,./0由北京经系统及其周围神经系统的生长、分化都具有明显生物制品研究所中试一室构建保存，6<@表达载体的营养作用，,./0对于运动性疾病如脊髓侧索硬（含/?启动子）、大肠杆菌UV&"(、@S!&（1W%）均为化症（>FJ:C9:67KLE8C598E;LE59:;K;，>S4）等具有治疗北京生物制品研究所中试一室保存。限制性内切作用。最近研究发现，,./0能够降低体脂，最终导酶、/*1.>连接酶购自+9:F5G8公司。6MD1.>聚致体重下降，因此,./0有望开发成为一种新型的合酶购自@:579KBG59V8BB75KF公司，点突变试剂盒〔%$’〕减肥药。由于,
7、./0天然序列中含有半胱氨酸，购自4C98C5G5B5公司。3$456789:;5<+为+789F8LK8容易形成分子间二硫键，进而形成二聚体，影响产品。其他化学试剂均为进口或国产分析纯试剂。,./0的生物学活性和稳定性。国外有文献报道，>=?69重组技术将,./0的&?位的半胱氨酸突变为丙氨酸、将#%质粒提取、酶切、回收、连接、转化、鉴定、+,-〔#〕位的谷氨酰胺突变为精氨酸、去除,末端的&’个氨扩增等均按分子克隆试验指南操作。,./0基因基酸等突变后可以增加它稳定性、溶解度和生物学序列的测定由博亚公司在>@Q&""自动测序
