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《T淋巴细胞对人骨髓造血细胞体外扩增的负调节作用3》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·310·中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2001;9(4)3T淋巴细胞对人骨髓造血细胞体外扩增的负调节作用田志刚 张建华 王郡甫 张 彩 孙 氵内(山东省医学科学院基础医学研究所,山东肿瘤生物治疗研究中心 济南 250062)摘要 采用抗CD3或抗CD8单克隆抗体的补体细胞毒方法体外清除人骨髓MNC(单个核细胞)中的T淋巴细胞和用流式细胞技术(FACS)分析细胞表面标志,观察人骨髓T淋巴细胞对造血细+胞增殖的负调节效应。将MNC加入含多种造血生长因子的培养基进行液态扩增并检测其C
2、D34细胞绝对数、粒2巨噬集落(CFU2GM)和多向祖细胞集落(CFU2GEMM)形成能力。结果表明,抗CD3,抗CD8或抗CD3+抗CD8单抗清除T淋巴细胞的骨髓MNC,其细胞总数经造血生长因子刺激培养20天分别扩增了75.8,79.6和77.4倍,明显高于对照组(67.0倍)。体外培养6天时CD8+清除组CD34细胞的扩增最高可提高17.82%。上述3个清除组的CFU2GM产率分别为173.67±18.90,165.33±26.58和170.33±21.50,对照组79.67±8.33。这3个清除组与对照组比较差异显著(P<0.05)。
3、上述3个清除组的CFU2GEMM产率分别为431.33±34.56,370.33±42.10和386.67±10.02,对照组为177.67±26.86。这3个清除组与对照组比较P值分别为<0.002,<0.05和<0.005。此研究结果提示骨髓中T淋巴细胞可以抑制造血细胞的体外扩增、CFU2GM和CFU2GEMM产率,其作用机制有待进一步探讨。关键词 T淋巴细胞 骨髓 造血细胞 细胞扩增中国图书资料分类法分类号 R331.144R331.22T淋巴细胞是一群异质性群体,对免疫及造血rhGM2CSF(Sandoz),rhSCF(S
4、andoz)和rhEPO(东阿具有重要的正、负调节效应。用体外清除骨髓单个阿胶集团)。核细胞(MNC)中某些T细胞亚群的方法观察T细淋巴细胞清除7胞对造血细胞扩增的影响少见报道。本研究采用抗取2.5×10MNC分别加入抗CD3,抗CD8或T淋巴细胞单抗的补体细胞毒方法清除人骨髓抗CD3+抗CD8单抗混匀置4℃,30分钟后离心弃MNC中的T淋巴细胞,试图验证骨髓T淋巴细胞上清,NS洗1次,弃上清,加入补体0.8ml,37℃,1是否抑制造血干P祖细胞体外扩增,为进一步了解T小时后加入NS洗2次,弃上清,IMDM混匀并计数淋巴细胞对造血细胞增殖分
5、化的影响奠定基础。备用。细胞表面标志分析材料与方法将T细胞清除前后的MNC进行FACS(FACScan,BectonDickinson公司)检测。抗CD3,抗CD8和抗样本采集及MNC制备CD34抗体(Pharmingen)为FITC标记,并设FITC标记无菌取胸外科切除的患者肋骨,用生理盐水的小鼠IgG(BD)对照,方法见文献[1]。(NS)反复冲出骨髓细胞,经淋巴细胞分离液(比重骨髓造血细胞体外扩增1.077)分离MNC,NS洗2次,计数备用。IMDM中含10%的小牛血清和细胞因子(终浓试剂度分别为rhIL215ngPml,rhIL23
6、2ngPml,rhIL26抗T淋巴细胞单克隆抗体(CD3和CD8杂交瘤细胞培养上清,终浓度20μgPml,本室自制),补体3本课题受国家自然科学基金(编号39970828)和山东省(为家兔混合血清,本室自制)。IMDM(Gibco),细自然科学基金(编号Q99C07)资助胞因子:rhIL21(Genzyme),rhIL23(Sandoz)和rhIL26 通讯作者:田志刚,E2mail:TZG@public.jn.sd.cn8(本室自制,比活>2×10UPmg),rhG2CSF(Kirin),2000-10-13收稿;2001-09-19接受
7、©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.T淋巴细胞对造血细胞体外扩增的作用·311·+300UPml,rhG2CSF10ngPml,rhGM2CSF200UPml清除组CD34细胞分别为35.56%,35.73%和5和rhSCF50ngPml)。细胞终浓度为5×10Pml(均35.02%,MNC对照组为26.06%,与培养起始比+以T淋巴细胞清除前的MNC数量为准),37℃,5%较,各清除组CD34细胞分别扩增12.01,12.63和CO2条件下进行孵育,
8、分别于3,5,7,10,13,17和11.52倍,对照组仅为10.72倍,T淋巴细胞清除使+20天传代并计有核细胞数。CD34细胞体外扩增能力最大可增加17.82%++造血祖细胞
