不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响

《不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、繁殖生理·ReproductionandPhysiology2010年第46卷第21期不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响莫显红1，李俊杰1!，夏威2，袁佃帅2，梁莹2，贾宝瑜2，朱士恩2（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.中国农业大学动物科技学院，北京100193）摘要：细胞骨架系统的稳定对于提高卵母细胞或胚胎冷冻后的存活率及其发育能力具有重要作用。紫杉醇（Taxol）作为细胞骨架稳定剂，可增强!、"!微管蛋白二聚体的紧密联系，增大微管交联，促进微管聚合和稳定

2、。本实验以绵羊体外成熟卵母细胞为材料，旨在探讨紫杉醇预处理对玻璃化冷冻绵羊卵母细胞存活率、形态正常率及体外受精后胚胎发育率的影响。采用0、0.5、1.0、1.5!mol/L的紫杉醇预处理绵羊卵母细胞并进行玻璃化冷冻保存，未经处理的新鲜卵母细胞为对照组。结果表明：采用浓度为0.5!mol/L紫杉醇预处理绵羊卵母细胞冷冻保存效果最佳，其解冻后的存活率（82.38%）与其他3个试验组相比有显著差异性（!<0.05）；体外受精卵裂率（51.17%）和桑囊胚率（20.30%）也显著高于其他3个试验组（!<0.05）

3、，但低于对照组（69.42%，34.77%）（!<0.05）。由此可见，以0.5!mol/L浓度的紫杉醇预处理组绵羊体外成熟卵母细胞冷冻后能获得较好的效果。关键词：紫杉醇；卵母细胞；玻璃化冷冻；绵羊中图分类号：S826.3文献标识码：A文章编号：0258-7033（2010）21-0024-04由于卵母细胞的来源受季节性和地域性的影响率及体外受精胚胎发育能力的影响。较为明显，为了能够使卵母细胞的供给不受时间和!材料与方法空间的限制，对卵母细胞进行玻璃化冷冻保存是行之有效的方法之一。卵母细胞的玻璃化冷冻保存

4、广1.1试剂实验所用TCM199购自Gibco公司，胎泛应用于人类的辅助生殖等医学领域，同时也为胚牛血清（FBS，Hycolon），促卵泡素（FSH，Folltropin-V，胎体外生产、转基因、克隆等胚胎生物技术提供了充加拿大产），促黄体素（LH，Lutropin-V，加拿大产），足廉价的实验材料，并为珍稀和濒危物种种质资源其他试剂均购自Sigma公司。保存提供了有效的技术手段。目前，许多成熟阶段的1.2卵母细胞的来源及成熟将屠宰场摘取的卵卵母细胞[1]和未成熟卵母细胞[2]经冷冻处理后均得巢放入35℃

5、含双抗的生理盐水中，4~5h带回实验到了正常后代，但其成功率仍然很低。大多数卵母室。用刀片划破卵巢表面2~6mm卵泡，在实体显微细胞在玻璃化冷冻过程中都将导致形态及功能上不镜下选择胞质均匀、带有3层及其以上完整致密的卵同程度的损伤[3]。而冷冻造成细胞骨架损伤（微管解丘颗粒细胞的卵母细胞复合体（COCs），移入100!!L聚导致纺锤体紊乱）被认为是冷冻效率降低的重要成熟培养液（TCM199+10!!g/mLFSH+10!!g/mLLH+原因之一[4]。紫杉醇作为细胞骨架稳定剂，可以在很大1!!g/mLE2

6、+20ng/mLEGF）微滴中培养，每滴入孵15程度上降低冷冻对卵母细胞微管的损伤，并且可显著枚卵母细胞，置于饱和湿度，5%CO2、38.5℃的二氧提高冷冻卵母细胞解冻后的发育能力[5，6]。因此，本研化碳培养箱内成熟培养24h。将成熟卵母细胞用透究以OPS为冷冻载体，研究不同浓度紫杉醇预处理明质酸酶消化，以卵母细胞周围留有2~3层颗粒细对绵羊体外成熟卵母细胞冷冻后存活率、形态正常胞为宜。充分洗净后供冷冻实验使用。根据处理不同——————————————将卵母细胞随机分成0、0.5、1.0、1.5!!mo

7、l/L紫杉醇收稿日期：2009-09-02；修回日期：2010-01-30处理组，用OPS法玻璃化冷冻；未经处理的新鲜卵资助项目：“十一五”国家科技支撑计划（2008BAD2B10）母细胞为对照组。作者简介：莫显红（1983-），女，内蒙古赤峰人，在读硕士研究生1.3卵母细胞的冷冻与解冻*通讯作者2010年第46卷第21期ReproductionandPhysiology·繁殖生理1.3.1溶液制备基础液：DPBS（Gibco）液添加3mg/mL弱或无绿色荧光的为死细胞。BSA。1.5体外受精受精液由

8、SOF添加20%FBS（胎牛FS液的配制：300g/L聚蔗糖（ficoll70000，Sigma）血清）+10!!g/mL肝素组成，体外成熟的卵母细胞在添加0.5mol/L蔗糖（sucrose），经DPBS液（添加3mg/mL受精液中洗3次，每15个卵母细胞移入30!!L受BSA）溶解后配制而成。精液滴中。通过上游法制备IVF精子，方法是将解冻预处理液：EG（ethyleneglycol:乙二醇）和DMSO的精液放入盛有2mL