萌发绿豆中水解大豆胰蛋白酶抑制子蛋白酶的纯化及固定化

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1、!"卷#期生物工程学报&’()!"*’)##$$!年%月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+,-./#$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!萌发绿豆中水解大豆胰蛋白酶抑制子蛋白酶的纯化及固定化陈中杨晓泉赵谋明（华南理工大学食品与生物工程学院广州9!$36!）关键词绿豆，蛋白酶，钝化，大豆胰蛋白酶抑制剂，固定化中图分类号?"12文献标识码@文章编号!$$$0%$3!（#$$!）$#0$#!!0$6大豆是豆类植物中最早发现存在蛋白酶抑制子的

2、，由于钝化A4F的活性。另取粗酶液加入（*T）至饱和度6#AW6其存在影响了豆类的利用价值，因此研究人员一直在寻找着%$X，6N过夜，!9$$$-／;<>离心!9;<>，上清液继续加入解决办法。采用加热处理方法不能彻底钝化豆类蛋白的蛋（*T）至饱和度3$X，!$$$$-／;<>离心沉淀（6N），沉6#AW6白酶抑制子活性，且豆类蛋白的含硫氨基酸主要存在于各类淀用9$;;’(／Q4-

3、冻干燥即为其营养效价。本研究的目的是试图寻找一种可在常温下降蛋白酶粗品。解豆类胰蛋白酶抑制子的蛋白酶，从而钝化豆类的胰蛋白酶!)#酶的纯化抑制活性。在前期工作中，我们发现枯草杆菌蛋白酶（ABC0!$#$!P:@:0A5I/,-’E5UQ03J离子交换：蛋白酶粗品按［!］，近D<(）可在在常温下降解花生及大豆胰蛋白酶抑制剂!$R／Q比例溶于9$;;’(／Q4-

4、酶抑制子，但@(.,(,E5仅可降解A4F中的GB>F>/0C<-L4-HIE<>公司产品）控制流速!)9;Q／;<>，待未结合蛋白洗脱后，用F>/流速线酶的抑制活性，本文试图从萌发的绿豆种子中分离纯化可降性洗脱!$/，每管收集!$;Q，按!$%测定胰蛋白酶抑制剂钝解大豆胰蛋白酶抑制子的

5、蛋白酶，研究其酶学特性并进行固化活性，收集具有酶活的组分，对4-，每管收集!$;Q，按!$%测定胰蛋白酶抑制剂钝化活性，子在

6、#9"%9N及黑暗条件下发芽不同时间，液氮研磨成粉，收集具有酶活的组份，用M:Y3$$$浓缩至一定体积。4+O6$N保存备用。A4F、*0苯甲酰0PQ0精氨酸0对硝基苯胺!$#$#[,D5-E@M0!.’(B;5（M-’D5<>0M,LP:@:!9T）离（J@M*@）和胰蛋白酶（活力为9$$$J@::／;R）购自A4+0M,LP:@:!9T柱（[,0司。D5-E@M0!）离子交换柱，9$;;’(／Q4-

7、，待未结合发芽绿豆粉以!S9（3／4）比例加入下述预冷的（6N）蛋白洗脱后，用含$"!)$;’(／Q*,U(的上述洗脱液于缓冲液：9$;;’(／Q4-流速线性洗脱9$;<>，每管收集%;Q，按!$%测!$;;’(／Q#0巯基乙醇及!;;’(／Q苯甲基磺酰氟。漩涡振定胰蛋白酶抑制剂钝化活性，收集具有酶活的组份，对4-，#$$$$-／;<>离心#$;<>（6N），提取#次，合并TU(缓冲液（9$;;’(／Q，IT1)$）透析，然后用M:Y03$$$浓上清液为粗酶

8、液。取不同发芽时间的粗酶液按!V9测定其缩，冷冻干燥即得到蛋白酶酶纯品。收稿日期：#$$$0$