艾丁湖沉积物放线菌多样性

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1、ResearchPaper研究报告微生物学报ActaMicrobiologicaSinica51(8):1023－1031;4August2011ISSN0001－6209;CN11－1995/Qhttp://journals．im．ac．cn/actamicrocn艾丁湖沉积物放线菌多样性1，31，322*1，3*夏占峰，关统伟，阮继生，黄英，张利莉1塔里木大学，新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，阿拉尔8433002中国科学院微生物研究所，微生物资源前期开发国家重点实验室，北京10

2、01013塔里木大学生命科学学院，阿拉尔843300摘要:【目的】为了研究新疆艾丁湖低海拔、高盐环境中的放线菌多样性。【方法】本研究应用基于16SrRNA基因序列系统发育分析的免培养方法和选择性分离培养方法相结合的方式对艾丁湖沉积物样品进行放线菌多样性分析。利用放线菌特异性引物扩增16SrRNA基因并构建了16SrRNA基因克隆文库，对文库中的插入序列进行RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism限制性片段长度多态性)分析。采用不同盐浓度的9种选择性培养基分离样

3、品中的放线菌。【结果】通过对16SrRNA基因克隆文库分析，273个克隆分布于放线菌纲(Actinobacteria)的放线菌亚纲(Actinobacteridae208个)、酸微菌亚纲(Acidimicrobidae13个)和红色杆菌亚纲(Rubrobacteridae52个)。该环境中优势放线菌为微球菌科的罗斯氏菌属(Rothia)，占到克隆总数的37%。有45.8%的序列与已有效发表菌株的序列相似性小于97%，部分序列形成了几个独立的进化分支，可能代表着放线菌新的类群。通过分离培养，共得到55株放

4、线菌，分布在放线菌目的6个亚目中，以链霉菌属(Streptomyces)和拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)为主要类群。有6株菌的16SrRNA基因序列与已有效发表菌株的序列相似性小于97%，为潜在的放线菌新分类单元。【结论】研究表明，艾丁湖中的放线菌具有较高的多样性，并蕴藏着多种新类型，有进一步研究价值。关键词:艾丁湖，放线菌多样性，免培养方法，选择性分离中图分类号:Q939文献标识码:A文章编号:0001-6209(2011)08-1023-09［2］极端环境的微生物经过长期的选择和适应，形酶

5、制剂产业中具有重要地位。极端环境中的放成了特殊的群落结构和多样性。但是绝大多数微生线菌因其可能的特殊性和新颖性受到越来越多的关［1］物目前尚不能被分离培养，一些生活在极端环境注。中的微生物更不容易分离得到。近年来，随着研究艾丁湖位于新疆吐鲁番盆地南部，是内陆型咸方法的改进，人们从极端环境中发现了越来越多的水湖，湖水矿化度最高可达到20%，海拔［3］微生物新种类，并从中发现了多种活性物质。放线－153.4m，是我国陆地最低点。作为吐鲁番盆菌是一类具有重要应用价值的微生物，在抗生素和地水系的最后归宿地，艾丁

6、湖底沉积物是吐鲁番盆基金项目:国家“973计划”前期研究专项(2010CB134505);国家自然科学基金项目(31060003);教育部科学技术重点项目(209145);中国科学院微生物资源前期开发国家重点实验室开放课题(SKLMR-20090603)*通信作者。Tel:+86-10-64807311，Fax:+86-10-64807311，E-mail:huangy@im．ac．cn(黄英);Tel:+86-997-4681612，Fax:+86-997-4681612，E-mail:zhang63

7、lyly@yahoo．com．cn(张利莉)作者简介:夏占峰(1981－)，男，山东济宁人，硕士研究生，主要从事极端环境放线菌资源方面的研究。E-mail:fenge3721@163．com收稿日期:2011-02-01;修回日期:2011-04-031024ZhanfengXiaetal．/ActaMicrobiologicaSinica(2011)51(8)地天然的微生物资源库。由于吐鲁番盆地干旱少受态细胞。蓝白斑筛选，将白色克隆转接于96孔细雨，湖水补给来源日趋减少，目前该盐湖正趋于干胞培养板中，

8、置于－70℃冰箱中保藏。涸，对艾丁湖微生物资源的保护和利用具有紧迫性。1.3.3克隆文库的检验及RFLP分析:对文库中的免培养技术能够快速全面地调查环境中微生物克隆用M13引物(M13-F:5'-CAGGAAAC的多样性，尤其是能获得难于分离培养的微生物的AGCTATGAC-3'，M13-R:5'-GTAAAACGACGGC信息。本研究利用免培养的这一优势，来指导艾丁CAGT-3')进行菌体PCR，以检测插入子的正确［8］湖沉积物放线菌的分