大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性

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1、大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性微生物学报ActaMicrobiologicaSinica51(2)：262—269；4February2011ISSN0001-6209；CN11-1995/Qhttp：//journals.im.ac.cn/actamicrocn林灵12341,2#1,3#1,3111*3,4*，谭亿，陈菲菲，周红霞，王以光，赫卫清，王勇中国医学科学院北京协和医学院，医药生物技术研究所，卫牛部抗牛素生物工程重点实验室，北京东北农业大学生命科学学院，哈尔滨15003061005220

2、0032中国医药集团四川抗菌素工业研究所生物部，成都100050中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所合成生物学重点实验室，上海摘耍：【目的】研究大连渤海老虎滩海域可培养放线菌的多样性。【方法】利用5种不同的培养基分离、培养海洋沉积物中的放线菌，并用16SrRNA基因序列对部分放线菌株进行系统发育分析。【结果】根据菌落表251株型共分离到1215株放线菌。选择271株具有代表性的菌株进行16SrRNA分析，结果表明，(92.26%)属于放线菌门，15个属；其余20株属于厚壁门和变形菌门；有7株为潜在的新种

3、。覆盖口个科，【结论】大连渤海老虎滩海域的沉积物中存在较为丰富的放线菌和新种资源，这些菌株为将来开发新的微生物代谢产物奠定了基础。关键词：大连渤海，可培养放线菌，系统发育，多样性中图分类号:Q939文献标识码：A6209(2011)02-0262-08文章编号：0001-样性是代谢产物多样性的基础oOhDC等从Salinisporapacifica屮分离得到cyanosporasidesA和B,chloro-和cyano-cyclopenta[a]indeneglycosides[11]；BuchananGO等从

4、Salinisporatropica[12]o另外,Salinispora中分离得到sporolidesA和B[13]salinisporamycin[14],菌株还可以产生arenimycin,海洋独特的环境特点如低温、低营养、高压、高盐度等造就海洋微生物自有的代谢方式和代谢产Zobell就从海水、物。早在1946年，海藻以及海泥中分离得到了多种放线菌O近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的海洋放线菌被发现，许多源于海洋放线菌的次级代谢产物也被鉴定出具有抗肿瘤剂[6]⑵[3][4][5],抗菌，抗疟，杀虫

5、功能以及酶抑制salinosporamideA-C[15]等生物活性物质。海洋环境将成为开发新型放线菌以及新药筛选的重要资源。本研究通过纯培养和基于16SrRNA基因序列的系统发育分析对大连渤海老虎滩海域釆集的海洋沉积物进行放线菌的多样性研究，旨在获得更多的海洋可培养放线菌资源，为今后开发新的牛物活性物质奠定基础。MincerTJ等人首次等生物活性功能。2002年，[7]自此发现了海洋特冇的放线菌属“Salinispora”，改变了人们原来对海洋放线菌的误解，认为其只是陆生放线菌的砲子流入海洋所产生。接着新型海洋

6、[8][9]放线菌属“Demequina”，“Marinispora”，[10]"Solwaraspora”也相继被发现。海洋放线菌的多基金项冃：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(IMBF20060202)10-83157099；E-mail：heweiqingl977@yahoo.com.cn,wy021@yahoo.com.cn通信作者。Tel:+86-作者简介：#并列第一作者。林灵（1985・），重庆人，博士研究生，主要从事微生物药学及生化学研究。谭亿（1985・），四川人，硕士研究生，主耍从事微生物

7、药学及生化学研究。收稿日期：2010-07-17；修回日期：2010-11-1511.11.1.1材料和方法材料主要仪器和试剂：PCR仪（BIO-RAD公（Andybio）；放线菌酮28°C生长3—5d,于膜上，揭去膜，再生长7—10do在2—5号培养基中加入放线菌酮100mg/L,荼呢酮酸50mg/Lo取200UL上清涂布平板，于28°C培7d左右挑取单菌落用相应的培养基进行划线养，后，于28°C培养7d,重复这一过程3-5次，对菌株进行纯化。所得纯培养物于20%甘油水溶液保存，一70°C放置备用。1.4基于1

8、6SrRNA基因序列的系统发育多样性分析菌株总DNA的提取:菌株总DNA的提取采[16]LA・Taq酶购自TaKaRa公司;chitin（Sigma）；司），polyvinylpyrrolidone为国产分析纯。1.1.2培养基：设计的5种培养基组成见表1。表ITablel(Andybio),蔡噪酮酸(Amersco)；其他生化试剂均1.4.11.4.2海洋微牛物的分离培