大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性_林灵.caj

《大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性_林灵.caj》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ShortCommunication研究简报微生物学报ActaMicrobiologicaSinica51(2):262－269;4February2011ISSN0001－6209;CN11－1995/Qhttp://journals.im.ac.cn/actamicrocn大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性1，2#1，3#1，3111*3，4*林灵，谭亿，陈菲菲，周红霞，王以光，赫卫清，王勇1中国医学科学院北京协和医学院，医药生物技术研究所，卫生部抗生素生物工程重点实验室，北京1000502东北农业大学生命科学学院，哈尔滨1500303中国医药集

2、团四川抗菌素工业研究所生物部，成都6100524中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所合成生物学重点实验室，上海200032摘要:【目的】研究大连渤海老虎滩海域可培养放线菌的多样性。【方法】利用5种不同的培养基分离、培养海洋沉积物中的放线菌，并用16SrRNA基因序列对部分放线菌株进行系统发育分析。【结果】根据菌落表型共分离到1215株放线菌。选择271株具有代表性的菌株进行16SrRNA分析，结果表明，251株(92.26%)属于放线菌门，覆盖11个科，15个属;其余20株属于厚壁门和变形菌门;有7株为潜在的新种。【结论】大连渤海老虎滩海域的沉积物中

3、存在较为丰富的放线菌和新种资源，这些菌株为将来开发新的微生物代谢产物奠定了基础。关键词:大连渤海，可培养放线菌，系统发育，多样性中图分类号:Q939文献标识码:A文章编号:0001-6209(2011)02-0262-08海洋独特的环境特点如低温、低营养、高压、高样性是代谢产物多样性的基础。OhDC等从盐度等造就海洋微生物自有的代谢方式和代谢产Salinisporapacifica中分离得到cyanosporasidesA和物。早在1946年，Zobell就从海水、海藻以及海泥B，chloro-和cyano-cyclopenta［a］indene［1］［11］

4、中分离得到了多种放线菌。近年来，随着分子生glycosides;BuchananGO等从Salinisporatropica［12］物学技术的发展，越来越多的海洋放线菌被发现，许中分离得到sporolidesA和B。另外，Salinispora［13］［14］多源于海洋放线菌的次级代谢产物也被鉴定出具有菌株还可以产生arenimycin，salinisporamycin，［2］［3］［4］［5］［15］抗肿瘤，抗菌，抗疟，杀虫功能以及酶抑制salinosporamideA-C等生物活性物质。海洋环境［6］剂等生物活性功能。2002年，MincerTJ等人首次将

5、成为开发新型放线菌以及新药筛选的重要资源。［7］发现了海洋特有的放线菌属“Salinispora”，自此本研究通过纯培养和基于16SrRNA基因序列改变了人们原来对海洋放线菌的误解，认为其只是的系统发育分析对大连渤海老虎滩海域采集的海洋陆生放线菌的孢子流入海洋所产生。接着新型海洋沉积物进行放线菌的多样性研究，旨在获得更多的［8］［9］放线菌属“Demequina”，“Marinispora”，海洋可培养放线菌资源，为今后开发新的生物活性［10］“Solwaraspora”也相继被发现。海洋放线菌的多物质奠定基础。基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项

6、(IMBF20060202)*通信作者。Tel:+86-10-83157099;E-mail:heweiqing1977@yahoo.com.cn，wy021@yahoo.com.cn作者简介:#并列第一作者。林灵(1985-)，重庆人，博士研究生，主要从事微生物药学及生化学研究。谭亿(1985-)，四川人，硕士研究生，主要从事微生物药学及生化学研究。收稿日期:2010-07-17;修回日期:2010-11-15林灵等:大连渤海老虎滩海域沉积物可培养放线菌的多样性./微生物学报(2011)51(2)263于膜上，28℃生长3－5d，揭去膜，再生长7－10d。1

7、材料和方法在2－5号培养基中加入放线菌酮100mg/L，萘啶1.1材料酮酸50mg/L。取200μL上清涂布平板，于28℃培1.1.1主要仪器和试剂:PCR仪(BIO-RAD公养，7d左右挑取单菌落用相应的培养基进行划线司)，LA-Taq酶购自TaKaRa公司;chitin(Sigma);后，于28℃培养7d，重复这一过程3－5次，对菌株polyvinylpyrrolidone(Andybio);放线菌酮进行纯化。所得纯培养物于20%甘油水溶液保存，(Andybio)，萘啶酮酸(Amersco);其他生化试剂均－70℃放置备用。为国产分析纯。1.4基于16Sr

8、RNA基因序列的系统发育多样性分析1.