柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响及其机制的实验研究

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1、柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响及其机制的实验研究辽宁中医药大学附属医院肿瘤科·潘玉真研究背景临床运用柴胡龙牡汤治疗存在咳嗽、咳痰等肺经症状的肺癌患者43例，显效5例（12%），有效31例（72%），无效7例（16%），总有效率（显效＋有效）达84%[1]。体内实验研究已证实，该药具有抑制Lewis肺癌细胞生长的作用，对荷瘤小鼠的抑瘤率可达31.4%[2]。[1]调整气机治疗肺癌肺经症状43例临床研究.秦海运，殷东风;实用中医内科杂志,2009,23(4)80-82.[2]肺积宁方对C57小鼠肺癌VEGF蛋白表达和生存质量的影响．现代肿瘤医学，2009,17（6）：104

2、2-1045.柴胡龙牡汤前期研究www.themegallery.com中药与细胞凋亡的研究肿瘤的发生不仅因细胞过度增殖，还与细胞凋亡机制受到抑制不能正常进行细胞死亡清除有关细胞凋亡过程多因素、多基因联合作用结果。中药复方成分更为复杂，其作用多环节、影响细胞凋亡方面可能更为有效辽宁中医药大学附属医院中药与细胞凋亡细胞凋亡与肿瘤研究背景www.themegallery.com实验动物C57BL/6J近交系小鼠，共60只，4-6周龄，清洁级，体重18-20g，雌雄各半。中国医学科学院医学实验动物研究所提供，饲养于辽宁中医药大学实验动物中心。辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院实验材料ww

3、w.themegallery.com瘤株Lewis肺癌瘤株(LewisLungcarcinomaLLC)，为小鼠来源的上皮样肺腺癌细胞。由中国医科大学免疫教研室提供。辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院实验材料www.themegallery.com柴胡龙牡汤药物组成：由柴胡、龙骨、牡蛎、黄芩、半夏、太子参、桔梗、炙甘草等11味中药组成。药物煎煮方法：先后用10倍水煎60min、8倍水煎煮40min，合并煎煮液，过滤后，浓缩至1.0g生药/ml，置于4℃冰箱保存备用。辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院实验药品www.themegallery.com顺铂顺铂(DDP)：齐鲁制药有限公

4、司产品,制剂规格为10mg/ml。每次给药前用0.9%生理盐水，把10mg顺铂稀释成1mg/ml顺铂注射液备用。辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院实验药品www.themegallery.com动物造模细胞株的复苏及C57BL/6J小鼠体内传代注入小鼠腹腔中，每只小鼠注射0.2ml。加入2ml生理盐水吹打混匀离心两次每次5min37℃水浴箱-80℃冰箱辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院www.themegallery.com动物造模模型制备辽宁中医药大学镜下调整细胞浓度为1×107/ml无菌抽取小鼠腹腔积液腹部隆起明显的小鼠0.2ml/只，接种于小鼠右侧腋部皮下辽宁中医药大附属医

5、院www.themegallery.com动物分组-模型组中药组化疗组综合组正常组肺癌模型组接种肺癌瘤株，不做治疗处理。中药柴胡龙牡汤组接种肺癌瘤株，并中药治疗。单纯顺铂化疗组接种肺癌瘤株，并化疗。柴胡龙牡汤＋顺铂综合组接种肺癌瘤株，中药联合化疗处理。正常对照组不做造模及治疗处理。共分5组辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院www.themegallery.com实验给药辽宁中医药大学化疗组顺铂注射液0.1ml/只/d（DDP0.1mg）腹腔注射化疗，共3次，于第1、3、5天给药。同时生理盐水0.4ml/只/d灌胃，共12天中药组柴胡龙牡汤0.4ml/只/d（含生药0.4g）灌胃，共

6、连续12天。第1、3、5天，生理盐水0.1ml/只/d，腹腔注射。辽宁中医药大学附属医院www.themegallery.com实验给药辽宁中医药大学综合组顺铂注射液给药剂量、方法同化疗组，柴胡龙牡汤用法同中药组。模型组正常组0.9%生理盐水0.4ml/只/d灌胃，共连续12天。并于第1、3、5天，0.9%生理盐水0.1ml/只/d，腹腔注射。辽宁中医药大学附属医院www.themegallery.com实验取材各组小鼠均于末次给药后24小时进行取材完整剥离出瘤体，称重后于冰盒上，将瘤块切开在无坏死区共取材3份，标本块大小约为1mm3。辽宁中医药大学Text蛋白测定电镜检测免疫组化检

7、测立即置于-20℃冰箱中冻存备用。于戊二醛固定液中，4℃冷藏备用。置于甲醛固定液中备用。辽宁中医药大学附属医院www.themegallery.com统计分析统计学分析采用SPSS11.0软件包。计量资料进行单因素方差分析（One-WayANOVA），组间比较采用最小显著差法（LSD）方法。等级资料采用非参数统计方法--秩和检验辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院实验指标透射电镜下观察肿瘤组织超微结构变化检测肿瘤组织中TNFα的蛋白表达，采用免疫组织化学法