小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

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1、小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响【摘要】目的　探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法　原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM，根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同，分为MEF条件培养基组、DMEM组，应用MTT法检测不同培养基对LLC增殖率的影响;再根据5-Fu作用与否，进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对LLC凋亡的影响。结果　成功获得原代培

2、养的MEF，表达α-SMA;MEF-CM较DMEM能够明显促进LLC细胞增殖(P<0.05);MEF-CM较DMEM能够明显抑制LLC细胞凋亡，并能够明显拮抗5-Fu的肿瘤杀伤作用(P<0.05)。结论　MEF是一种活化的成纤维细胞，具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性，有促进LLC增殖及抑制凋亡的作用，可以作为肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究。【关键词】小鼠胚胎成纤维细胞;Lewis肺癌细胞;肿瘤微环境;肿瘤相关成纤维细胞;细胞增殖;细胞凋亡;细胞培养ABSTRACT：Objective　Toexpl

3、orewhetherornotmouseembryonicfibroblasts(MEFs)havebiologicalactivitiessimilartothoseoftumor-associatedfibroblasts.Methods　MEFswereobtainedbyprimarycultureandtheexpressionofα-smoothmuscleactin(α-SMA)wasidentifiedbyimmunohistochemistry.MEFcondition

4、edmedium(MEF-CM)wasobtainedfromhighglucoseDMEMwhichwasculturedfor48h.Onthebasisofdifferentmedium，thegroupsweredividedintoMEFconditionedmediumandDMEMones.ThegrowthrateofLewislungcarcinoma(LLC)cellswasmeasuredbyMTTandapoptosiswasfurthermeasuredbyflowcytometera

5、ccordingtowhetherLLCwasinfluencedby5-Fu.Results　MEFswereobtainedsuccessfullyandcouldexpressα-SMA.ComparedwithDMEM，MEFconditionedmediumcouldsignificantlypromoteLLCproliferationandinhibitLLCapoptosis(P<0.05).MEFconditionedmediumcouldalsoresistthelethalef

6、fectonLLCinducedby5-Fu(P<0.05).Conclusion　MEF，akindofactivatedfibroblasts，hasbiologicalactivitiessimilartothoseoftumor-associatedfibroblastsandcanpromotetheproliferationoftumorcellsandinhibittheirapoptosis.MEFcanbeusedastumor-associatedfibroblastsinresearcho

7、ftumormicroenvironment.KEYWORDS：mouseembryonicfibroblast(MEF);Lewislungcarcinomacell;tumormicroenvironment;tumor-associatedfibroblasts;proliferation;apopotosis;cellculture小鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryonicfibroblast，MEF)是一种来源于小鼠胚胎组织的成纤维细胞，在干细胞工程中因其能够分泌多种生长因子支持干细胞分裂增殖，

8、而被用作饲养层细胞[1]。肿瘤相关成纤维细胞(tumor-associatedfibroblasts，TAFs)是肿瘤组织中活化的成纤维细胞，在肿瘤发生、发展的各个阶段发挥重要作用，是肿瘤研究的热点[2]。TAFs具有取材困难、不易分离纯化的缺点，而MEF易于取材、纯化和培养。本实验培养并观察MEF是否具有TAFs相似的生物活性，以及在体外对Lewis肺癌细胞(Lewislungcar