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《照射时间延长对小鼠Lewis肺癌凋亡影响初步观察.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、照射时间延长对小MLewis肺癌凋亡影响初步观察【摘要】目的模拟IMRT照射模式,观察照射时间延长对小鼠Lewis肺癌凋亡的影响及Caspase-3表达的变化。方法将荷Lewis肺癌C57BL/6雄性小鼠40只随机分为假照组、常规照射组(A组)、IMRT模拟组(B1组和B2组)4组,照射后取出肿瘤,测细胞凋亡率,及Caspase-3表达。结果各组凋亡率的差别有统计学意义(F=41.83,P1.2主要试剂和仪器PI染液和兔抗鼠Caspase-3单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司(美国SantaCruzBiotech
2、no-logy公司提供)。Triton-x-100购自北京中衫金桥生物技术有限公司。Varian23EX408高能直线加速器由青岛大学医学院附属医院肿瘤中心提供。美国BD公司岀品FACSort流式细胞仪。荧光显微镜(BH-2型)为日本OLYMPUS产品。1.3实验方法1.3.1荷瘤小鼠模型的制备将种鼠断颈处死后,在无菌条件下分离出生长良好的肿瘤组织,用0.9%生理盐水洗净血性物后,用天平称重。剪碎后按肿瘤组织加入0.9%生理盐水3mL的比例,经砚磨成均浆后经200目筛网过滤,0.4%台盼蓝染色,活细胞拒染,死细胞则被
3、染成蓝色,显微镜下计活细胞数,用生理盐水稀释为2.8x106mL・1,制成瘤细胞悬液,将0・2mL的瘤细胞悬液接种到健康小鼠右腹股沟皮下。接种后1周,肿瘤体积为(0.65±0.01)cm3,随机分组进行实验[4]。1.3.2实验分组荷lewis肺癌的C57BL/6雄性小鼠40只随机分为假照组、常规照射组(A组)和2个IMRT模拟组(B1和B2组)4组,40只/组。1.3.3照射方法将小鼠(包括假照组小鼠)用10%水合氯醛(350mg/kg)经腹腔麻醉后,用胶布固定在固定板上,记号笔标出小鼠肿瘤体表定位,在瘤体上放1c
4、m厚凡士林纱布补偿,用美国Varian23EX408高能直线加速器产生的6MV-X线垂直照射靶区,源皮距为100cm,剂量率为6Gy/min,照射野均为2.0cm畑0cm,总照射剂量15Gy/h鼠均在清醒状态下照射。(1)A组分3次照射,照射间隔时间1.7分钟,总时间6min;(2)B1组:分5次照射,照射间隔时间7.0分钟,总时间30分钟;⑶B2组:分5次照射,照射间隔时间10.5分钟,总时间45分钟;各组总照射剂量相同。照射后的小鼠脱颈处死。1.3.4细胞凋亡及Caspase-3的检测剥离肿瘤组织,去除坏死组织,
5、剪碎后70%乙醇固定,洗涤后再过滤,加入RNA酶水浴PI染色,上机检测细胞凋亡率;加入0.1%Triton-x-100,洗涤后,加入Caspase-3单抗,上机检测。1.4统计学方法所有数据均用士s表示。采用SPSS13.0forwindows统计软件包,进行单因素方差分析,P参考文献[1]殷尉伯,田凤华.2001年全国放射治疗人员及设备调查报告[J]冲华放射肿瘤学杂^,2002,11(3):145-147.[2]陈杰,程惠华.立体适形调强放射治疗进展[J].福州总医院学报,2006,13(3):125-129.[3
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