中药润肺消积汤治疗lewis肺癌小鼠的实验研究

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1、中药润肺消积汤治疗Lewis肺癌小鼠的实验研宄张傅姜家康(黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040)【中图分类号】R285.6【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)11-0057-03【摘要】目的观察润肺消积汤对肺癌小鼠肿瘤生长抑制作用及治疗的作用机制。方法取100只小鼠随机分为空白组，模型对照组，润肺消积汤组，顺铂(DDP>组，联合组(润肺消积汤加顺铂)，每组20只，将后四组小鼠移植建立肺癌小鼠模型[1],治疗期间，观察小鼠肿瘤生长情况，实验后，处死小鼠，称取瘤重，计算抑瘤率，做病理切

2、片，并采用免疫组化法观测组织蛋白酶B(CB)染色阳性率。结果各治疗组抑瘤率均高于模型对照组(P<0.05),联合组抑瘤率高于其他治疗组(P<0.05)；各治疗组CB染色阳性率均低于模型对照组(P<0.05),联合组CB染色阳性率低于其他治疗组(P<0.05)。结论润肺消积汤联合顺铂对肺癌生长具有协同抑制作用，并可降低肺癌细胞CB表达。【关键词】肺癌组织蛋白酶B(CB)润肺消积汤实验研究近年来，肺癌已成为常见的恶性肿瘤之一，实践证明，中医药在综合治疗肺癌方面有独特的优势。木实验通过给予肺癌小鼠润肺消积汤，以观

3、察润肺消积汤对肺癌小鼠治疗增效的作用机制及对肿瘤生长的抑制作用，并为润肺消积汤的临床应用提供实验依据。1材料与仪器1.1药物和仪器设备，试剂盒药物润肺消积汤：丙洋参，黄芪，南沙参，黄精，紫苑，款冬花，枇杷叶，半边莲，白花蛇舌草，山慈燕，川W,地骨皮，甘草等中药，购自黑龙江中医药大学附属第一医院中药局。仪器医用超净工作台SW-GIF:中国苏州净化设备有限公司；超低温冰箱MDF-328:曰木三洋公司；倒置式生物显微镜：tl木OLYMPUS公司；高速冷冻离心机：R21日本日立制作所；超薄切片机：日本OLYMPUS

4、公司；电子天平（FA2004型）：上海天平仪器厂；电热恒温水浴箱：北京医疗设备厂；免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司。1.2动物C57BL/6N小鼠100只，6-8周龄，雄性，体重18-22g,购自黑龙江中医药大学实验动物中心。1.3瘤株Lewis肺癌荷瘤小鼠，购自哈尔滨医科人学附属第三医院实验动物中心。2方法2.1Lewis肺癌小鼠动物模型的建立将lewis肺癌荷瘤小鼠处死后，放入75%的洒精中浸泡消毒10分钟，按无菌操作程序，在超净工作台上剥离瘤体，取生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水冲洗，

5、然后将肿瘤组织放于盛奋生理盐水的烧杯中剪碎、研磨，用生理盐水以1:3的比例匀浆制备成细胞悬液，随机取出20只小鼠作为空白对照组，其余80只小鼠肺内接种肺癌瘤细胞悬液0.2ml,按照标准条件进行人工饲养。2.2分组及给药将未接种肺癌瘤细胞悬液的20只小鼠作为空白对照组,日一次给予生理盐水0.2ml/只，灌胃。将接种瘤细胞悬浊液后-•周成瘤的模型小鼠随机分四组，每组20只，分别为模型对照组，日一次给予生理盐水0.2ml/只，灌胃；润肺消积汤组（生药量35.00g·kg-l·d-l）,

6、日一次0.2ml/只，灌胃；顺铀组[2]2mg·kg-l·d-l，用生理盐水稀释，日一次0.2ml/只，腹腔内注射；联合（润肺消积汤加顺铂）组，给予润肺消积汤（生药量35.00g·kg-l·d-l）,瞞日一次，0.2ml/只，灌胃，并以顺钴0.2ml/只，用生理盐水稀释，日一次，腹腔内注射，连续给药30天。2.3一般检测与观察指标2.3.1末次给药后24h,将各组小鼠颈椎脱闩处死，用眼科剪分离剥取肿瘤，电子天平称重量，计算各组小鼠平均瘤体质量，计算抑瘤

7、率。2.3.2瘤组织病理检查及免疫组化肿瘤组织经体积分数10%福尔马林固定24小时后常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，苏木素-伊红（HE）染色，肉眼观察肿瘤生长，光镜下观察肿瘤坏死及间质血管增生情况。免疫组化采用SABC法，石蜡切片常规脱蜡、水化，0.3%H2O2去除内源性过諷化物酶，正常羊血清封闭，滴加一抗，滴加后4°C过夜，对照片免去一抗用PBS缓冲液代替一抗进行阴性对照。次日滴加二抗，滴加试剂SABC,DAB显色，苏木素复染。观察免疫组化分析组织细胞中的CB阳性反应（CB阳性表现为细胞质着成棕色）

8、：小于30%的肿瘤细胞染色阳性为CB阴性反应，大于30%的肿瘤细胞染色阳性为阳性反应，统计染色阳性结果，计算阳性率。2.4统计学处理实验数据以均数±标准差（x-±S）表示，P<0.05有显著性差异，所有数据均经SPSS13.0软件处理。3实验结果3.1药物对肿瘤的影响接种后前三天各组未见明显肿瘤生长，从第八天开始，除空白组外，其余各组均可见肿瘤生长，模型对照组肿瘤生长明显快于其他治疗组