小麦幼胚愈伤组织培养和抗赤霉病体细胞筛选

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1、华中农业大学学报IO(1)t9—15，l11ournalofHuazhon#Ayricul~ralUniversity小麦幼胚愈伤组织培养和抗赤霉病体细胞筛选。曹清波余毓君(华中农业太学枉学系，武汉430070)摘要采用幼胚愈伤组织培养技术，观察了亲本和杂种后代及赤霉病粗毒素处理与否的愈伤组织筮育过程．结果表明：(1)不同基因型在出愈率．出愈势、愈伤块大小及方差垒能性愈伤组织的比率．褐变率．淘汰率．分化率上均有差异．F．表现出杂种优势，或优于【譬亲值，或超出双亲平均值．(2)赤霉索粗毒素处理后，愈伤块受抑制．褐

2、变增加，出苗率降低．在脱离毒素境后的恢复力和再生能力上，Fl优子亲本．有较强的耐毒能力。(3)选用杂种厦改良品种作诱变材料可以提供较大的细胞水平上的选择性．关键词小麦：赤霉病；幼胚愈伤培养；全能性愈伤：体细咆筛选中圈法分类号：$336：$435．121．45组织培养的细胞选择应用于怍物改良依赖于该作物的无性繁殖体系的建立。Shimada(1969)r”首次从小麦幼胚中诱导出愈伤及再生植株。从此，有关小麦组织培养再生檀株的研究越来越多．利用体细胞无性系变异改变抗性时，既可以进行细胞水平的诱变，又可以进行细胞水平筛

3、选．还能把细胞筛选与再生植株早期抗性鉴定相结台以提高工效。小麦幼胚培养操作衙单，分化率高，实验室操作能很好与大田季节相配套因而能广泛用于体细胞无性系的研究和育种。小麦赤霉病是长江流域最主要病害，危害甚大．目前无免疲品种．已有的抗源只是抗性程度上的差异。因而寻找新的抗源、提高丰产品种的抗性就成为生产上追切需要解决的问题．组织培养技术及体外筛选无性系变异为抗源开拓提供了可能。本试验对小麦幼胚愈伤组织的生长发育、早期判断全能性愈伤和体细胞抗性筛选效应进行研究．以期有益于小麦抗赤霉病遗传育种工作。奉吏1990--08-

4、2敢副‘夸生却袁o2—02乖题首助嘎目10华中农业大学学报io善1材料与方法1．1供试材料丰产感病品种鄂恩一号(P)抗病品种温州红和尚(P)和望水白(P)及其杂种PIxP2、PxPs。取亲本及杂交当代l4天胚龄的幼胚，70％酒精处理30,-,,-60秒，0．1％升汞消毒15分钟，无菌水冲洗3次，切下幼胚接种．1．2培养条件诱导和继代培养基：每升内含2MS大量元素、1MS微量元素、300mE谷氨酰氨、150mg天门冬酰氨、100rag肌醇、10rag维生索BL、lmg维生索B5、ling烟酸、2mg甘氨酸、1mg

5、2，4一D、0．1ragKT2％蔗糖。分化培养基：每升内含MS无机盐100rag肌醇、1000rag水解酪蛋白0．4rag2，4一D0．1ragKT、3％蔗糖。生根培养基：每升内台音MS大量元素1MS微量元素、1．5％蔗糖．以上培养基均用0．7％的琼脂固化，pH5．8"-,6．0，高压灭菌。每月继代一次，4次继代后转八分化培养基，培养温度为25±2℃自然散光，分化时用日光灯照明。1．j曩毒囊舶制鲁浓缩与处理：将从鄂麦g号麦穗上分离的禾谷镰刀菌武昌菌株的菌丝，置八1MS无机盐添加5啊蔗糖的液体培养基中，振荡培养1

6、2天，滤除菌丝，加热浓缩1／4，高压灭菌后保存．粗毒索处理愈伤组织两次，于第2敬和第3敬继代前一周加毒液于试管内，浸至愈伤块高度的一半处，粗毒索的浓度第1次按l：3加无菌水稀释液浓缩至原浓度，第2次按1：1稀释按照Ozlas—AI【ins(1982)的际准，将能出茁的愈伤称为全能性愈伤．1．4童伤块舶整体染色FlAA(I)固定24d,时，7O％酒精保存，经5O呖酒精后，用爱氏苏术精染色，经3O％、5O呖到7O嘶酒精保存。，2结果与分析2．1童仿组级柏嚣导不同基因型出愈率相差甚大(表1)．F偏高亲或超高亲．温州红

7、和尚的强出愈势是值得注意的特点，杂种早期出愈快与基因型杂台性有关．2．2童仿组皱舶生长最初为圆形的愈伤，当增睦到4—511111时，愈伤组织表面局部细胞突起形成新愈伤，新生愈伤在几个部位同时发生，其表面仍按增长——局部突起的方式继续长大，当长到一定大小继代时，可按愈伤块的自然状态分离，保持其内部结构的完整性，按原来放置方向使其继续生}乏。停止生氏的枣伤表现褐变井有一定程度的收缩出现了继代过程中的大小分1七，，l朔曹清波等：小麦幼胚愈伤组织培养和抗赤霉病体细胞筛；盎i1表拿的资料反映出群体大小的分化情况。总愈伤块

8、和全能性愈伤块的直径均值有很大差异，垒能性愈伤组织直径增长速度明显高于非全能性愈伤．随着继代次数的增加而愈来愈明显．两种愈伤块内．各愈伤块的生长速度也不相同．其大小分布呈两头小、甲间太的趋蛰，方差也随继代次数而增大，方差的增大表明愈伤块直径分布更离散。按全能性愈伤块直径的均值选留大愈伤．随着继代次数的增加，大愈伤块的颓率越来越低(表4)。F愈伤块的生长速度偏高亲或超高亲，表现出明显的杂