木薯胚性愈伤组织离体保存条件的筛选.pdf

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1、ChinaTropicalAgriculture生保佳木薯胚性愈伤组织离体保存条件的筛选一愈一芽侧枝一薯验试一以一在存一度温同一糖浓及不以黎一～表结选筛条制℃果保性萍凇细～私州一度一聃缸一愈中生一性胚至长一。一著砌刖呸一．(广西壮族自治区亚热带作物研究所广西南宁530001)伤对条长织性下狮况打木薯(Cassava)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯1-2方法属(Manihot)的灌木状植物，是世界三大薯类作物之1．2．1不同保存条件处理一【”，广泛栽培于热带和亚热带地区，其栽培及加工利本试验

2、采用由品种GR3腋芽诱导出的颗粒状胚性愈用在农业生产中占有重要的地位。目前世界各木薯生产伤在常规固体保存培养基(GD培养基+Picloraml2mg／L国收集保存的木薯种质已有8500多份[2】。为充分发挥资+蔗糖25g／L+脂琼6．5g／L)上添~1]2mg／L、6mg／L、源优势，发展我国木薯产业，对木薯种质资源进行研究10mg／L不同浓度的生长抑制剂比久(B9)和烯效唑和保存具有十分重要的意义。最近几十年中，以植物组($3307)；在GD+Picloraml2mg／L+脂琼6．5g／L固体培织培

3、养技术为基础的缓慢生长离体保存技术也得到了迅养基中分别附加10g／L、30L、50g／L的蔗糖；以正常接速发展，目前已成功地应用于多种植物种质资源的离体种后材料在不同温度0℃、10oC、15℃、20oC、26℃条保存【。本试验通过在培养基上添加生长抑制剂对木薯件下保存。上述处理每培养皿接人愈伤组织0．5g，均放胚性愈伤组织进行离体保存，测定不同天数保存愈伤组置在20℃培养，光照度1500～2000Lx，光照时间12h／d，织的细胞活力及形态指标，旨在筛选出木薯种质资源短在温室下生长50d后，统计愈伤量

4、、愈伤质地、颜色及期保存的适宜方法，为木薯种质资源的长期离体保存提生长情况。供参考依据。1．2_2胚性愈伤组织保存条件的筛选方法综合上述试验得出的结果，对常规保存培养基进1材料和方法行适宜调整，选用愈伤质地及生长情况表现较好的1．1供试材料愈伤组织分别添加到抑制剂比久(B9)和烯效唑浓试验所用组培材料来源于广西亚热带作物研究所度均为6mg／L、蔗糖30g／L常规保存固体培养基『为对照培育的木薯品种GR3，利用木薯嫩枝侧芽而诱导出来(CK)忡，置于25℃，光照度1500～2000Lx，光照时并经不同培养

5、基以及不同天数保存的胚性愈伤组织作间12h／d，培养7d后，转人20℃下，光照强度和时间不为测定材料。试验所采用的缓冲液体系均是以0．2mol／L变。每20d、40d、60d、80d、100d观察一次，测定处理NaH，PO4-Na，HPO磷酸盐溶液为母液配制而成。组与对照组胚性愈伤组织生长量及细胞活力。基金项目：广西自然科学基金资助项目(2012GXNSFAA053072)。作者简介：黎萍(1966__)，女，大学本科，农艺师。E-mail~fipinggx1026@163．com。5314蕊蕾矗n蛐

6、由置热莆IHJChinaTropicalAgriculture1．2．3细胞活力测定方法值。并以OD值为纵坐标，以1TrF的含量数为横坐标，绘木薯胚性愈伤细胞活力TTC法测定方法参照白宝制出以甲醇为溶剂的标准曲线(见图1)。璋【4】的方法，略有改动。1．2．5甲醇浸泡法1．2．4标准曲线制作把胚性愈伤取出，用循环水真空泵滤干水分，再用取0．4％TTC溶液0．25mL，加乙酸乙酯9．75mL和少量滤纸压干愈伤组织水分，放入试管中，加人5mL甲醇溶保险粉于lOmL容量瓶中，充分摇动，所生成的红色TTF液，

7、然后将试管置于35℃保温箱3h，使愈伤组织完全变溶液作为已知母液。取5只lOmL容量瓶，按照表1所给白。将红色提取液移入容量瓶，最后加入甲醇使总量数据配制系列浓度溶液，并用甲醇定容。用紫外分光光为lOmL，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白度计比色，以甲醇作空白对照，波长485nm，记录OD为对照试验作参比测出吸光度，查标准曲线，求出TTC还原量。1．2．6保存效果的评价方法表1TTF系列浓度溶液的配制用外观、生长量及细胞活力等指标评价胚性愈伤组织的保存效果。在外观上主要观察愈伤组织的颜色，生

8、活力强的胚性愈伤组织为鲜明的淡黄色，在衰母液O．250．501．001．502．00甲醇9．759．509．008．508．00老过程中胚性愈伤组织逐渐变为褐色；生长量的测定采用称重法；细胞活力的测定采用氯化三苯基四氮唑(TTC)法is】。趔0．7002结果与分析000．6002．1不同保存条件对木薯胚性愈伤组织的形态指标0．500影响0．400在培养基中添加蔗糖是一种常用的缓慢生长保存0．300手段，通过提高培养基的渗透势负值，造成水分逆境，0．200