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《甘草胚性愈伤组织的诱导因素研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、药用甘草胚性愈伤组织的诱导因素研究雷呈作者简介：雷呈（1972—），男，汉族，河南省信阳人，硕士，讲师，主要从事生物化学的教学与科研工作。E-mail:leich0504@sina.com（河南省南阳陕学高等专科学校基础洪学部，河南南阳473000）摘要:目的诱导甘草胚性愈伤组织，以获得高产细胞株。方法以四种甘草为材料，从基因型、外植体、激素等因素研究和分析愈伤组织诱导、胚性愈伤组织的发生和发育的过程。结果①胀果甘草愈伤质量好，诱导率高；②适宜的外植体是下胚轴；③甘草细胞适宜愈伤组织诱导培养基：MS+6-BA2.
2、0mg/L+2,4-D0.5mg/Lo结论适宜的基因型、外植体和激素是诱导甘草细胞胚性愈伤组织的主要因素，为进一步筛选甘草高产细胞株、生产甘草生物活性物质、基因工程奠定了基础。关键词:甘草；胚性愈伤组织,诱导因素甘草属于豆科｛Leguminosae）甘草J^（Glycyrrhiza）多年生草本植物，含有甘草酸、甘草次酸、黄酮类化合物等生物活性物质，具有补脾益气、清热解毒、润肺止咳、缓急止痛、调和诸药Z功效⑴，是药物的天然宝库。利用甘草细胞培养物代替野生甘草来生产药物，成为甘草应用的主流之一。在细胞培养中，筛选或诱
3、发次生代谢产物高的体细胞突变系进而培养成高产细胞株，是提高细胞培养物的有效途径。胚性愈伤组织的细胞分化能力强，从其中可以筛选出高产细胞株，为细胞大规模生产生物活性物质具有重要意义。口前大多数国内学者的研究集屮对甘草的分离提取、纯化和活性成分药理实验2钊，对甘草的基础性研究还不够深入。本文以药典收载的正品甘草为材料，对影响甘草胚性愈伤组织形成和发生的因素进行了研究，旨在筛选合适的甘草高产细胞株，为甘草的大规模生产生物活性物质、基因工程和人工制种奠定基础。1材料和方法1.1实验材料供试材料乌拉尔甘草(GlycyrHi
4、izaHFabnsisFisch)、胀果甘草(GlycyrrhizainflateBat.)光果廿草(GlycyrrhizaglabmL.)、黄廿草(Glycyrrhizakorshhvtkyi)由新疆昆神公司提供。1.2无菌外植体的获得取供试材料种子各约200粒，分别置于烧杯屮，先用98%浓硫酸处理30〜40min,无菌水冲洗至少5次，然后用1%升汞消毒8〜10min,无菌水清冼三次，每次3〜5min,消毒完后接种在MS固体培养基上，黑暗中培养。待苗长到4〜5cm左右时，转到光下培养3d后取其下胚轴并切成0.5
5、cm左右切段，进行后续实骑。1.3基因型对出愈率的影响采用MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L培养基，接种四种基因型甘草的下胚轴，每种处理3瓶（250ml三角瓶），每瓶80ml培养基，每瓶接种15个下胚轴，横放，黑喑培养。在30d时统计外植体的岀愈率和观察愈伤组织的质量。1.4外植体对愈伤诱导率及愈伤组织质量的影响采用乌拉尔甘草不同的外植体：下胚轴、子叶、试管苗幼叶、幼嫩茎段，接种在MS1:MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L和MS2：MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0
6、.5mg/L+NAA0.5mg/L培养基上，每种外植体处理3瓶（250mL三角瓶）,每瓶80mL培养基，每瓶接种15个外植体，横放，黑暗培养。约30d后统计出愈率和观察愈伤组织的质量。岀愈率：在接种一定时间后，以发生愈伤组织的外植体数和接种数的比值表1.5不同激素组合对愈伤诱导率及愈伤质量的影响取乌拉尔甘草的下胚轴，并切成0.5cm左右切段，每种处理3瓶（250ml三角瓶），毎瓶80ml培养基，毎瓶接种15个下胚轴，横放，黑暗培养。30d后统计外植体的出愈率和观察愈伤组织的质量。处理1MS+6-BA0.5mg/L
7、+2,4-D0.5mg/L+NAA0.5mg/L处理2MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.5mg/L处理3MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.5mg/L处理4MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L处理5MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0」mg/L2结果与分析2.1不同基因型对愈伤诱导率的影响图1表明，甘草的出愈率为75.5%〜97.5%之间，不同基因型的岀愈率存在较大差异。形成愈伤的能力以胀果甘草最强，出愈率为97.5%,其次是乌拉尔甘草(90.1%),黄甘
8、草最低(75.5%)o2.2不同外植体对愈伤诱导率及愈伤组织质量的影响结果表明，外植体类型对出愈率有很大影响(图2),在MSI培养基上接种的外植体，出愈率为45.3%〜99.5%,而MS2培养基上为40.2%〜92.5%。无论是MSI还是MS2培养基，都以下胚轴最高，幼嫩茎段最低。图2还表明，MSI诱导愈伤的能力相对较强。图2不同外植体对愈伤组织诱导的影响不同外植体获得的
