木薯胚性愈伤组织诱导及其离体保存的研究.pdf

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1、-——48-——江苏农业科学2015年第43卷第2期黎萍，黄秋伟，彭靖茹，等．木薯胚性愈伤组织诱导及其离体保存的研究[J]．江苏农业科学，2015，43(2)：48—52doi：10．15889／j．issn．1002—1302．2015．02．014木薯胚性愈伤组织诱导及其离体保存的研究黎萍，黄秋伟，彭靖茹，石兰蓉，李慧敏(广西壮族自治区亚热带作物研究所，广西南宁530001)摘要：以4个不同木薯品种(SC205、GR3、GR891、GR911)的无菌苗幼叶或带有腋芽的茎段为试验材料，研究不同植物生长调节剂浓度及组合对其胚性愈伤组织诱导的影响，并对其离体保存条

2、件进行了研究。结果表明：2，4一D和毒莠定对4个不同木薯品种的幼叶及腋芽均能诱导出胚性愈伤，诱导能力为GR3最高，其次为SC205。4个品种以幼叶或腋芽为试料，在毒莠定或2，4一D为12mg／L时(除GRgl1幼叶、GR891腋芽)，诱导效果最佳；相同木薯品种在不同激素组合的诱导条件下，IBA+6一BA浓度为(1．5+0．8)mg／L组合诱导胚性愈伤分化数量多于单独使用IBA、6一BA，表现出一定的显著差异性。在20℃条件下，将GR3木薯胚性愈伤组织保存在添加比久(B。)或烯效唑浓度为6ms／L的保存培养基(含12ms／L毒莠定+3Og／L蔗糖+6．5g／L脂琼

3、的GD培养基，pH值5．8)中，保存效果最佳，继代时间延长至80d。关键词：木薯；胚性愈伤；离体保存；蔗糖；B。；烯效唑；细胞活力中图分类号：Q943．1；s533．043文献标志码：A文章编号：1002—1302(2015)02—0048—04木薯(Cassava)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯属(Mani—B、烯效唑等。hot)的灌木状植物，是世界3大薯类作物之一⋯，在我国广为1．2试验方法栽培，主要栽培于热带和亚热带地区。木薯的栽培及加工利1．2．1诱导改良分化培养基配制M。培养基：MS+2moL／L用在农业生产中占有重要的地位，目前世界各木薯

4、生产国收CuSO4+2％蔗糖+0．3％琼脂，pH值6．0；M2培养基：Ml+集保存的木薯种质已有8500多份，国内主要采用种质资12．0ms／L6一BA；M3培养基：M1+毒莠定或2，4一D；M培源圃的形式对木薯种质资源进行保存，这种保存方式需要大养基：M】+6一BA／IBA，或M1十6一BA+IBA。量的土地和人力资源，成本高，保存数量有限，且易遭受各种1．2．2无菌外植体获取取上述4个不同木薯品种无菌苗自然灾害的侵袭。离体保存技术的迅速发展，为长期有茎切段在M培养基上继代培养扩繁，获得大量无菌苗备用。效地保存木薯种质资源提供了新的有价值的手段，由于其具1．2

5、．3腋芽及幼叶的膨大诱导取在M培养基上培养4有省时、省地、省空间和无病虫害侵害等优点，目前正广泛用周的无菌苗，切取1．0～1．5til带腋芽的茎段或者幼叶，将其于生产实践的各个领域。有关木薯胚性愈伤组织离体保存的水平放置在M：培养基上，30个／皿，培养温度26℃，每天光研究较少，因此，笔者以广西壮族自治区亚热带作物研究所提照16h(800～1000k)，膨大培养3～7d，观察记录。供的木薯品种为试验材料，进行了木薯胚性愈伤组织诱导及1．2．4胚性愈伤组织的诱导2，4一D及毒莠定是2种最常其离体保存的研究，以期为木薯种质资源的长期离体保存提用的诱导胚性愈伤的激素，

6、优化激素浓度组合研究中设定2，供参考依据。4一D及毒莠定的浓度梯度均为6、12、14、18mg／L。在M中分别添加不同浓度的2，4一D或毒莠定，即为诱导培养基M，。1材料与方法挑取已膨大的芽点(约1mm)或者从茎尖挑取1—2mm幼1．1试验材料叶，转移到M培养基，30个／皿，5mI／处理，26℃暗培养。每1．1．I供试品种供试木薯品种SC205、OR891、GR911、2d在体视显微镜下观察胚性愈伤的发生情况，第4天开始记GR3均由广西木薯研究所、广西亚热带作物研究所提供。录，统计外植体形成初生胚的数目，计算出胚率。当球形或鱼1．1．2试验仪器主要仪器有电子分析

7、天平、超净工作台、雷形胚出现，则将其转移、继代到新鲜M，培养基上备用。高压灭菌锅、紫外可见分光光度计、电热恒温培养箱、循环水1．2．5体细胞胚的继代、成熟将M培养基上诱导获得的真空泵。初生胚状体从培养块分离、转移到新鲜的M上继代培养，诱1．1．3试剂甲醇、保险粉(Na2S：O)、氧化三苯基四氮唑导次生胚状体发生和增殖，2周继代1次，建立循环培养；观(TI'C)粉、石英砂、蔗糖、琼脂、2，4一D、6一BA、IBA、毒莠定、察、统计增殖速率。1．2．6胚性愈伤组织保存条件的筛选方法选择由品种GR3腋芽诱导出的颗粒状胚性愈伤组织，在显微镜下用针头收稿日期：2014—0

8、5—29基金项目：广西壮