毛竹种胚愈伤组织诱导及防褐化的初步研究

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1、分类号：０７８５Ｓ７２２．３６Ｓ７９２．１１９单位代码：１０３６４密级；学号；１２７２０１２７？签傲參公大ｆ学位论文毛竹种胚愈伤组织诱导及防褐化的初步研究Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｉｙｓｔｕｄｏｎｂａｍｂｏｏｓｅｅｄｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｆｂｒｏｗｎｉｎｇ研究生：粒康指导教师：项艳教授申请学位口类级别；农学硕±专业名称：园林棺物与观赏园艺研究方向：园林楠物遗传育种所在学院：

2、林学与园林学院答辩委员会主席：１换２０１５年６月独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大學或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期年／月／日／学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有

3、权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编■学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学位论文作者签名；碰指导教师签名：令紙）签字日期：才＾＾＾文年谷月／／日〇（广年《月＂日签字日期：学王位论文作者毕业后去向：作单位：电话；通信地址：邮编；摘要佛肚毛竹(Phyll

4、ostachysheterocycla(Carr.)Mitford'Ventricosa)是刚竹属、散生型竹种，是毛竹的一个重要变种。高大挺拔的毛竹四季常青且在我国栽培面积分布广泛、经济价值较高。本文主要从佛肚毛竹种胚的活性特征、种胚的愈伤组织诱导以及愈伤组织防褐化处理这三个大的方面来进行研究。以佛肚毛竹种胚作为接种外植体，主要围绕着种胚的最佳浸种时间和浸种温度、种胚的消毒灭菌方式、诱导愈伤形成的最佳培养基类型和激素配比、愈伤组织的增殖和不同防褐化处理方法对抑制褐化现象产生的效果等方面开展研究，获得了以下主要的实验结果：1、影响佛肚毛竹种子萌发的主

5、要因素有两个：浸种温度和浸种时间。其中最佳浸种温度是35℃，最佳的浸种时间为5h。2、佛肚毛竹种子最适的消毒灭菌方法为：75%酒精完全浸泡4min→无菌水反复冲洗6次→2%NaClO溶液完全浸泡12min→无菌水反复冲洗6次→0.2%HgCl2溶液完全浸泡15min（含3-4滴吐温-20）→无菌水反复冲洗6次→吸干外植体表面水分→接种。3、影响佛肚毛竹种胚愈伤诱导形成的主要因素有：种胚的接种方式、基本培养基类型、2,4-D和ZT的浓度。其中，在切除种胚大部分胚乳，并将种胚有沟槽的一面向下且水平放置接种的前提条件下，佛肚毛竹种胚诱导愈伤形成的最适培养

6、基类型是：MS+4.5mg/L2,4-D+0.2mg/LZT+8g/L琼脂+28g/L蔗糖，pH=5.8，诱导率为60%。4、在种胚诱导愈伤的培养基中添加一定浓度的脱落酸（ABA）能够有效的抑制伴随诱导愈伤组织一起出现的不定芽和不定根，并且能改良愈伤组织的形态特征，最佳的ABA浓度为2mg/L。5、影响佛肚毛竹种胚愈伤增殖的主要因素有：基本培养基类型、2,4-D、NAA和6-BA。佛肚毛竹种胚愈伤增殖最适培养基类型是：MS+2.0mg/L2,4-D+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA+8g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH=5.8。I6、防褐

7、化处理过程中可以有效的遏制佛肚毛竹种胚的愈伤组织褐化，其主要处理方法有：接种前外植体的预处理、添加不同类型的抗氧化剂、控制光照强度。最佳的实施方式为接种前用100mg/L的半胱氨酸对种胚进行浸泡，培养基中添加10mg/L的抗坏血酸，接种后置于黑暗条件下进行培养，上述三种处理能够有效的抑制褐化现象的出现。综上所述，本文一方面研究佛肚毛竹种胚的活性特征，筛选出最适宜种子发芽的浸泡温度和时间、种子的接种方式等。另一方面研究了佛肚毛竹组培中无菌体系的建立和诱导种胚愈伤组织产生的最佳激素组合，并且筛选出有效的防褐化的方法。其研究结果为毛竹遗传转化体系的建立奠

8、定了实验基础，对毛竹基因工程育种具有重要意义。关键词：毛竹种胚生理活性愈伤褐化组织培养IIAbstractPhyllost