刺五加愈伤组织诱导及褐化抑制.pdf

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1、2014拄辽宁林业科技2014第1期JournalofLiaoningForestryScience&TechnologyNol刺五加愈伤组织诱导及褐化抑制朱雪征(辽宁省青山保护局，辽宁沈阳110001)摘要：分别以刺五加1年生茎、叶柄和嫩叶为外植体，在附加不同浓度NAA和6-BA组合的WPM培养基上进行愈伤组织初代培养，并对继代培养中出现的褐化进行抑制。结果表明：嫩叶为最佳外植体，在各激素配比中的诱导率均达到最高，其中添加0．5mg／L6-BA~,0．1mg／LNAA的诱导率最高98．2％。在继代培养时，向培养基中添加

2、500mgm活性炭，5d暗培养继代10d，能有效降低刺五加愈伤组织的褐化。关键词：刺五加；愈伤组织；诱导；褐化中图分类号：$723．132．6文献标识码：A文章编号：1001—1714(2014)01—0024．03刺五加(Acanthopanaxsenticosus)是五加科五加6cm)，用流动的自来水冲洗30min，无菌条件下，属落叶灌木，是重要的中草药n。由于刺五加在自用75％酒精处理15S，再用0．1％的HgCI消毒5～然状态下结实的株丛少、种子虫害较重、产量低、自7min，无菌水冲洗5～6次后，分别将嫩叶叶柄斜

3、切然状态后熟时间长、休眠程度深等原因口，加之长期(0．2～0-3cm小段)、1年生茎(0．4～0．5cm小段)和的过量采掘，导致我国刺五加资源被严重破坏，在嫩叶(0．2cm~0-3ClTt的小块)接种于添加不同浓度一些地方，相当长的时期内无法更新恢复，甚至有NAA(0．1、0．2mg／L)和6-BA(0．5、1．0、1．5mg／L)的些种群在较大的面积上急剧减少或消失。因此，WPM培养基上进行诱导培养。l5d后统计愈伤组离体培养已成为增加刺五加产量的主要手段之织诱导率、生长状态及褐化程度。一。目前已有关于刺五加组织培养方

4、面的研究报1．2．2愈伤组织褐化抑制道，但对愈伤组织诱导及褐化现象的抑制未见报为了抑制愈伤组织褐化，在继代培养设计3因道。本文以刺五加1年生茎、叶柄和嫩叶为外植体，素水平正交试验。3因素为：A连续暗培养时间(1、进行愈伤组织初代诱导；并在继代培养中通过正交3、5d)，B培养基中抗褐化剂活性炭浓度(0、500、试验对易出现的褐化现象进行了抑制，旨在得到较l000mg／L)，C继代时间(10、15、20d)。正交表选好的抑制条件，为今后刺五加愈伤组织培养及药用用L(3)]。10d后统计褐化率。产品工厂化生产提供参考依据。试验

5、结果用SPSS18．0软件进行分析。1材料与方法2结果与分析1．1材料2．1不同外植体诱导的愈伤组织生长情况刺五加由辽宁省森林经营研究所苗木繁育中接种3～5d后，嫩叶先后出现卷曲和明显增心提供，外植体为其叶柄、1年生茎和嫩叶。以厚，颜色变淡；10d后叶柄和茎开始发生明显增厚；WPM培养基为基本培养基，蔗糖20～30g／L，琼脂15d后嫩叶发生较多黄绿色致密的愈伤组织，呈现6～7g／L，pH值5．8。光照强度1200～1500lx，光明显的脱分化状态，其中部分出现芽的分化；25d照时间12h／d，培养室温度20~2℃。后叶

6、柄和茎出现愈伤组织，并出现不同程度明显的I．2方法褐化。1．2．1愈伤组织诱导2．2不同激素配比对愈伤组织诱导的影响选生长健壮的刺五加带叶1年生枝段(5～茎在培养基中的诱导率较低，褐化程度较轻，收稿日期：2013．07．29—24—第1期朱雪征：刺五加愈伤组织诱导及褐化抑制生长状态一般，以添加1．5mg／L6-BA、0．1mg／L程度，可见对刺五加愈伤组织褐化影响的因素依次NAA的诱导率最高，仅31．8％(表1)。为活性炭浓度>继代时间>连续暗培养天数。根据表1茎诱导愈伤组织的形成情况各因素平均值k的大小，可得出降低其褐

7、化的最优组合为AB：c，。通过单因素方差分析得出，因素B对褐化率的影响达到显著水平(P

8、33123123l23叶柄在培养基中的诱导率一般，褐化较严重，以添加1．0mg／L6-BA和0．1mg／LNAA的诱1导2率3最2313l2高48．O％(表3)。另外，当NAA浓度固定时，随着注：单因素方差分析中达显著水平(P≤0．05)。6-BA浓度增加，嫩叶的愈伤组织诱导率降低，而褐B。与B：，B与B之间显著差异