蓖麻花药愈伤组织诱导及防褐化研究.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第3期陈永胜，邵志敏，李国瑞，等．蓖麻花药愈伤组织诱导及防褐化研究[J]，江苏农业科学，2014，42(3)：39—4J0．蓖麻花药愈伤组织诱导及防褐化研究陈永胜，邵志敏，李国瑞，黄凤兰，王文跃，(1．内蒙古民族大学，内蒙古通辽028000；2．内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心，内蒙古通辽028000；3．赤峰市敖汉旗新惠六中，内蒙古赤峰024300)摘要：通过改变花药接种前的预处理、培养条件，建立了高效蓖麻花药愈伤诱导体系，结果表明：以通蓖5号为试材，4℃预处理3d，维生素c浸泡1．5h，培养基中添加活性炭0．6geL、维生素C200mgeL，暗

2、培养15d可获得高诱导率、低褐化率的蓖麻花药愈伤组织。关键词：蓖麻；花药；诱导愈伤；防褐化中图分类号：$565．604．3文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)03—0039-02蓖麻(RicinuscommunizL．)为多年或一年生双子叶植物，选最佳花药愈伤诱导基因型，并统计花药低温预处理1、3、5、多用于航空航天、化工、医药等行业，应用价值高、市场潜力7、9d时的诱导率及褐化率。大⋯。我国是蓖麻种植大国，但蓖麻新品种的开发一直局限1．2．2．2暗处理对愈伤组织诱导的影响以通蓖5号花药手杂交、选择等传统育种方式，没有将现代育种技术应用于蓖为材料，接种后暗处理0、5、

3、10、15、20d，统计花药愈伤诱导率麻育种。花药培养可获得蓖麻育种上广泛应用的纯系品及褐化率。种，但较低的蓖麻花药愈伤诱导率、高褐化率一直是限制蓖麻1．2．2．3维生素C浸泡处理对愈伤组织诱导的影响以通花药离体培养的主要限制性因素。外植体培养过程中褐化的蓖5号花药为材料，置于100mg／L维生素C中分别浸泡0、原因很多，机理较为复杂，多认为是培养条件、细胞死亡或是0．5、1．0、1．5、2．0,4．0h，统计蓖麻花药愈伤组织的诱导率与细胞中的酚类物质变质等因素导致。本研究通过接种不褐化率。同基因型、维生素C浸泡、改变培养条件(暗培养、添加防褐1．2．2．4防褐附加物对愈伤组织诱导的影

4、响以通蓖5号物)，探索适宜蓖麻花药培养的最适条件，以期有效提高诱导花药为材料，分别接种于添加不同浓度活性炭(0、0．3、0．6、率、降低褐化率，建立高效蓖麻花药愈伤诱导体系。0．9、1．2geL)和维生素C(0、100、150、200、250mgeL)的培养基中，统计诱导率及褐化率。1材料与方法2结果与分析1．1试验材料哲蓖4号、通蓖5号、通蓖9号蓖麻花药，采白内蒙古民2．1不同基因型及低温预处理愈伤诱导率和褐化率族大学试验农场。在温度较低、日照较弱时，取健壮无病的植从表1可知，3个基因型的愈伤诱导率均随着低温预处株上花被尚未张开且呈淡黄色的花蕾。理时间的增加呈先增后减的趋势，褐化率均

5、呈先减后增的趋1．2试验方法势，且均在低温处理3d时褐化率最低。褐化具有一定的传播1．2．1材料准备本研究根据黄凤兰等研究，取同时期、性，故选择褐化率最低、诱导率最高的最适基因型。综合表1质优的花蕾，流水冲洗30min，75％乙醇消毒30s、0．1％可知，愈伤组织的褐化率与基因型差异相关，通蓖5号在低温HgC1灭菌2min，无菌水冲洗3～5次，转移至铺有灭菌滤纸预处理3d时褐化率最低(3．20％)，且此时3个基因型中通的培养皿。去除花丝，每瓶接种1／3个花蕾(约230个)，封蓖5号愈伤诱导率也最高(15．94％)。口后置于培养室培养。在以下的试验设计中，每个处理接种表1低温预处理对愈伤

6、诱导及褐化的影响5瓶，3次重复。基础培养基：MS+蔗糖40g／L+琼脂7L+处理时愈伤组织诱导率(％)愈伤组织空!脯氨酸600mg／L+酸性水解酪蛋白600mgeL+NAA间(d)哲蓖4号通蓖5号通蓖9号哲蓖4号通蓖5号通蓖9号1．0mg／L+zT3．0mgeL，pH值=6．0。1．2．2蓖麻花药诱导愈伤防褐化体系筛选1．2．2．1不同基因型及低温预处理愈伤诱导率和褐化率取哲蓖4号、通蓖5号、通蓖9号花药，在相同培养条件下筛收稿Et期：2013—08一O12．2暗处理对愈伤组织诱导的影响基金项目：国家自然科学基金(编号：31060194)。作者简介：陈永胜(1971一)，男，内蒙古通辽

7、人，博士，教授，主要从事如表2所示，花药愈伤诱导率随暗处理时问的增加有所作物生物技术研究。Tel：(0475)8314624；E—mail：chenys一2012提高，愈伤褐化率随时间的增加先减后增，且在暗处理15d@hotmail．corn。时愈伤诱导率达到最大值、褐化率达到最小值。-——40-——江苏农业科学2014年第42卷第3期表2暗处理对愈伤组织诱导的影响表3维生素C浸泡处理对愈伤组织诱导的影响2．3维生素c浸泡处理对愈伤组织诱导的影