卵巢颗粒细胞体外培养体系的建立及ＤＥＨＰ、ＭＥＨＰ对其增殖功能的影响

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1、卵巢颗粒细胞体外培养体系的建立及ＤＥＨＰ、ＭＥＨＰ对其增殖功能的影响【摘要】目的：建立卵巢颗粒细胞的原代培养体系，探讨邻苯二甲酸二（２－乙基）己酯（ＤＥＨＰ）及其活性中间产物邻苯二甲酸单（２乙基）己酯（ＭＥＨＰ）对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。方法：选用２１～２５　日龄未成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，皮下注射孕马血清（ＰＭＳＧ），４８ｈ后断头处死，收集卵巢颗粒细胞，在ＤＭＥＭＦ１２培养液中培养。卵巢颗粒细胞原代培养体系建立成功后分别将不同剂量的ＤＥＨＰ（１μＭ、５μＭ　、２５μＭ、５０μ

2、Ｍ、１００μＭ）和ＭＥＨＰ（１μＭ、５μＭ　、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ）作用细胞２４ｈ及４８ｈ，以ＣＣＫ８法检测细胞增殖情况。结果：ＤＥＨＰ作用卵巢颗粒细胞２４ｈ时，１μＭＤＥＨＰ　和１００μＭＤＥＨＰ均能明显抑制卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。ＤＥＨＰ作用卵巢颗粒细胞４８ｈ时，１μＭＤＥＨＰ　和１００μＭＤＥＨＰ均能明显促进卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。而ＭＥＨＰ作用卵巢颗粒细胞２４ｈ及４８ｈ，ＭＥＨＰ各染毒剂量组均无统计学差异（Ｐ＞０.０５）

3、。结论：ＤＥＨＰ能促进卵巢颗粒细胞增殖，并且和作用时间长短有关。ＭＥＨＰ在观察剂量下，尚未显示有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用。【关键词】ＤＥＨＰ；ＭＥＨＰ；细胞增殖；卵巢颗粒细胞Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｏｖａｒｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉ（２ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）　ｐｈｔｈａｌａｔｅ　ａｎｄ　ｍｏｎｏ（２ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）　ｐｈｔｈａｌａｔｅ　ｏｎ　ｉｔｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

4、　ｉｎ　ｒａｔｓＺＨＡＮＧ　Ｙｕｍｉｎ，　ＭＡ　Ｍｉｎｇｙｕｅ，　ＤＵＡＮ　Ｚｈｉｗｅｎ，　ＰＥＩ　Ｘｉｕｃｏｎｇ，ＳＵ　Ｘｉｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００３４，　Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｂｕｉｌｄ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｏｖａｒｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ，　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ

5、　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｄｉ（２ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）　ｐｈｔｈａｌａｔｅ　ａｎｄ　Ｍｏｎｏ（２ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ）　ｐｈｔｈａｌａｔｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：２１－２５　ｄａｙｓ　Ｗｉｓｔｅｒ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＭＳＧ，　ａｆｔｅｒ　４８ｈ　ｏｖａｒｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｎｄ

6、　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＤＭＥＭ－Ｆ１２．　Ａｆｔｅｒ　ｒａｔ　ｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ，　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　１μＭ、５μＭ　、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ　ＤＥＨＰ　ａｎｄ　１μＭ、５μＭ　、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ　ＭＥＨＰ　ｆｏｒ　２４ｈ　ｏｒ　４８ｈ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　

7、ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＣＣＫ－８　ａｓｓａｙ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　１μＭ　ａｎｄ　１００μＭ　ＤＥＨＰ　ｆｏｒ　２４ｈ，　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃｅｌｌｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０.０５）．Ａｆｔｅｒ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　１μＭ　ａｎｄ　１００μＭ　ＤＥＨＰ　ｆｏｒ　４８ｈ，　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　

8、ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０.０５）．Ａｆｔｅｒ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ＭＥＨＰ　ｆｏｒ　２４ｈ　ａｎｄ　４８ｈ，　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｈａｎｇｅ（Ｐ＞０.０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤＥＨＰ　ｃａｎ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｖａｒｉａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ，　ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ．　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　ＭＥＨＰ，